MAPK在慢性粒細(xì)胞白血病信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用及其作用機(jī)理研究.pdf

1、該研究以CML細(xì)胞Ras-MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的MAPK為靶點(diǎn),應(yīng)用反義技術(shù),以陽離子脂質(zhì)體作為轉(zhuǎn)染載體,設(shè)計(jì)并合成了與mapk mRNA翻譯起始部位的17個(gè)堿基序列互補(bǔ)的反義寡核苷酸(mapk ASO),聯(lián)合bcr/abl反義寡核苷酸(bcr/abl ASO)作用于CML細(xì)胞系K562和體外培養(yǎng)的原代CML骨髓細(xì)胞,通過封閉bcr/abl和mapk基因的表達(dá)以在不同環(huán)節(jié)作用于CML細(xì)胞,借助MTT、<'3>H-TdR摻入、集落形成、

2、蛋白合成、γ-<'32>P摻入、免疫印跡、RT-PCR、電鏡、流式細(xì)胞儀、片段DNA含量檢測(cè)和DNA梯狀電泳等試驗(yàn)和手段,從不同角度,采用多項(xiàng)指標(biāo),在細(xì)胞,蛋白及分子水平上系統(tǒng)探討了MAPK在CML發(fā)病中的作用、作用機(jī)理及其與bcr/abl融合基因的關(guān)系.該研究證實(shí),mapk基因反義寡核苷酸通過抑制MAPK活性、MAPK蛋白表達(dá)和含量而誘導(dǎo)CML細(xì)胞凋亡,逆轉(zhuǎn)其惡性表型;mapk基因反義寡核苷酸對(duì)bcr/abl融合基因表達(dá)無明顯影響,b

3、cr/abl基因反義寡核苷酸通過封閉bcr/abl融合基因表達(dá)而抑制MAPK活性、MAPK蛋白表達(dá)和含量,進(jìn)而誘導(dǎo)CML細(xì)胞凋亡,逆轉(zhuǎn)細(xì)胞惡性表型;mapk基因反義寡核苷酸和bcr/abl基因反義寡核苷酸聯(lián)合作用具有協(xié)同效應(yīng);MAPK的激活是CML發(fā)病、發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一,Ras-MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑通過介導(dǎo)凋亡抑制信號(hào)而在CML的發(fā)病中起重要作用,MAPK可作為CML治療的新靶點(diǎn).探索出一種治療CML的全新模式:采用"反義"策略抑制基