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文檔簡(jiǎn)介
1、前列腺癌的防治是泌尿外科領(lǐng)域的一個(gè)重要課題。癌基因、抑癌基因的突變、缺失、異位等引起的細(xì)胞周期失控往往可以導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。LBH(limb-bub and heart)基因是前列腺癌中的表達(dá)下調(diào)基因,免疫組化結(jié)果顯示LBH基因在一些前列腺癌組織中的表達(dá)水平明顯低于正常的前列腺上皮組織。為探討LBH基因?qū)η傲邢侔┑淖饔?,本研究選取LBH低表達(dá)的前列腺癌細(xì)胞系PC-3M,擬通過慢病毒感染構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)LBH的前列腺癌細(xì)胞株,初步探討LBH基因
2、對(duì)前列腺癌PC-3M細(xì)胞增殖和遷移的影響及其分子機(jī)制。
目的:以低表達(dá)LBH基因的人前列腺癌細(xì)胞PC-3M為模型,構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)LBH基因的前列腺癌PC-3M-LBH細(xì)胞株,初步探討LBH基因?qū)C-3M細(xì)胞增殖、遷移的影響及其可能涉及的分子機(jī)制。
方法:
1.構(gòu)建表達(dá)LBH基因的慢病毒載體并包裝慢病毒,用慢病毒感染人前列腺癌 PC-3M細(xì)胞后,經(jīng)嘌呤霉素篩選建立穩(wěn)定表達(dá) LBH基因的PC-3M-LBH細(xì)胞株
3、;
2.采用CCK-8法和Transwell分別檢測(cè)細(xì)胞的增殖和遷移能力,分析LBH基因?qū)C-3M細(xì)胞增殖和遷移能力的影響;
3.流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry)確定LBH基因表達(dá)前后前列腺癌細(xì)胞PC-3M細(xì)胞周期的變化;
4.通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western Blot技術(shù)檢測(cè)基因mRNA及蛋白表達(dá)。
結(jié)果:
1.成功構(gòu)建了表達(dá)LBH基因的重組慢病毒表達(dá)載體并包裝出了相
4、應(yīng)的慢病毒pLenti-LBH,通過篩選和傳代培養(yǎng)獲得了穩(wěn)定表達(dá)LBH基因的PC-3M-LBH細(xì)胞株;相對(duì)對(duì)照組細(xì)胞,其LBH基因的 mRNA和蛋白表達(dá)顯著上調(diào);
2. LBH表達(dá)抑制了PC-3M細(xì)胞的增殖,在細(xì)胞接種后第5天,PC-3M-LBH細(xì)胞相對(duì)于PC-3M-NC細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率為19.7%。Transwell實(shí)驗(yàn)中,PC-3M-LBH組遷移細(xì)胞數(shù)為(50±10),顯著低于PC-3M-NC組(250±16)和PC-3M
5、組(300±13);
3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示:PC-3M-NC細(xì)胞中G1期和S期百分比分別為51.77%和25.89%,而PC-3M-LBH細(xì)胞組中G1期和S期的細(xì)胞分別占細(xì)胞總數(shù)的65.83%及16.77%,表現(xiàn)為細(xì)胞周期G1-S期阻滯;
4. qRT-PCR結(jié)果顯示:相對(duì)PC-3M-NC和PC-3M細(xì)胞,PC-3M-LBH細(xì)胞中Cyclin D1、Cyclin E2mRNA水平顯著下調(diào)。
結(jié)論:LBH基
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