細胞因子M-CSF和核轉錄因子促進Fral-1對巨噬細胞向M2d型的轉化作用.pdf

1、目的：探究AP-1(Activator protein-1)家族成員分子c-Jun和c-Fos是否在M1型巨噬細胞向M2d型巨噬細胞轉化中發(fā)揮作用，胞外刺激因子M-CSF是否在這一轉化過程中發(fā)揮作用，核因子NF-κB是否與AP-1協(xié)同促進了這一轉化。
　　 方法：RAW264.7巨噬細胞與小鼠乳腺癌細胞(4T1)共同培養(yǎng)模擬重構腫瘤微環(huán)境，應用實時熒光定量的手段檢測RAW264.7中c-Fos、c-Jun、NF-κB相關分子mR

2、NA的水平，同時應用免疫細胞化學和WB的手段檢測胞內(nèi)c-Fos和c-Jun蛋白水平。應用ELISA技術檢測單獨培養(yǎng)組和共培養(yǎng)組上清中M-CSF(Macrophage-colony-stimulating factor)的含量；檢測巨噬細胞對其敏感度，進而分別使用M-CSF(30ng/ml)和中和抗體與RAW264.7共培養(yǎng)，在基因和蛋白水平檢測AP-1家族和NF-κB家族對M-CSF的敏感性。
　　 結果：RAW264.7細胞與

3、4T1細胞或其上清共培養(yǎng)后，RAW264.7無論從基因還是蛋白水平，Ap-1家族c-Jun都顯著性表達增加，c-Fos的表達變化并不明顯；共培養(yǎng)后上清液中M-CSF的消耗較之單獨培養(yǎng)RAW加劇；加入M-CSF刺激后，c-Jun mRNA激增，而在加入中和抗體后，c-Jun表達明顯下調(diào)，同時NF-κB家族p65呈現(xiàn)與c-Jun相似的變化趨勢；WB結果顯示核內(nèi)p-Jun蛋白水平激增，加入中和抗體后，水平降低。
　　 結論：轉錄因子c