可溶性人類白細(xì)胞抗原G作為胚胎發(fā)育與著床潛能標(biāo)志性分子的研究.pdf

1、研究背景：在體外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中，選擇具有著床潛能的胚胎移入患者子宮內(nèi)是保證妊娠的前提。目前，國內(nèi)外廣泛采取單一的形態(tài)學(xué)評估方法挑選胚胎，但這種方法預(yù)測能力有限，亟需尋找可以更好地預(yù)測胚胎著床潛能的無創(chuàng)性指標(biāo)。
　　近年來眾多研究顯示胚胎培養(yǎng)上清（ECs）中可溶性人類白細(xì)胞抗原G（sHLA-G）的表達(dá)與IVF結(jié)局具有相關(guān)性，有望成為臨床選擇移植胚胎的無創(chuàng)標(biāo)志物，但既往研究中檢測方法和培養(yǎng)條件多樣，各個研究的結(jié)果

2、無可比性，這些因素影響sHLA-G的檢測及其對結(jié)局的預(yù)測作用，使其結(jié)論存在爭議。
　　研究目的：通過一系列研究驗(yàn)證sHLA-G能否作為IVF中胚胎發(fā)育與著床潛能的標(biāo)志性分子，以期為IVF-ET胚胎移植時提供無創(chuàng)性的選擇標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步提高IVF臨床妊娠率，減少移植胚胎數(shù)以降低多胎妊娠的發(fā)生，從而改善IVF結(jié)局。
　　研究方法：本課題最大限度地標(biāo)準(zhǔn)化sHLA-G檢測方法和胚胎培養(yǎng)中的一些重要參數(shù)，設(shè)計單中心回顧性研究、多中心大樣本

3、回顧性研究觀察ECs中sHLA-G表達(dá)與IVF結(jié)局的關(guān)系。采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法檢測ECs中sHLA-G濃度，測得值高于最低檢測濃度定義為sHLA-G陽性胚胎，低于最低檢測濃度者定義為陰性胚胎。移植至少一個sHLA-G陽性胚胎的周期為sHLA-G陽性周期，移植胚胎全部為sHLA-G陰性者，定義為sHLA-G陰性周期，比較兩組間的臨床妊娠率（PR）與胚胎種植率（IR）。進(jìn)一步設(shè)計前瞻性臨床對照研究，擬行凍融胚胎移植

4、（FET）患者采用隨機(jī)原則分為兩組，實(shí)驗(yàn)組解凍sHLA-G陽性胚胎進(jìn)行移植，對照組解凍sHLA-G陰性胚胎進(jìn)行移植，比較兩組間PR與IR。在方法學(xué)上進(jìn)行改進(jìn)，采用電化學(xué)發(fā)光免疫方法(ECLI)對ECs中sHLA-G進(jìn)行檢測,并應(yīng)用該方法開展單中心初步臨床研究。
　　結(jié)果：
　　1.采用ELISA方法檢測來自單中心53個ICSI周期的ECs共113份，在至少移植了一個sHLA-G陽性胚胎的sHLA-G陽性周期中，68.4％獲得

5、了臨床妊娠，移植胚胎全部為sHLA-G陰性的陰性周期PR為39.4%(P＜0.05)。sHLA-G陽性周期的IR也高于陰性周期（51.3%vs24.3%，P＜0.05)。
　　2.多中心回顧性研究共檢測了全國九家生殖中心924個IVF周期2041份ECs，25.5%（521份）檢測到sHLA-G表達(dá)。移植胚胎全部為sHLA-G陽性胚胎共87個周期，部分移植sHLA-G陽性胚胎306周期,全部移植sHLA-G陰性胚胎531周期，三組

6、的妊娠率分別為49.4%，55.2%和37.3%，（P＜0.05）。兩兩比較提示前兩者PR均高于全部移植sHLA-G陰性者，但兩者之間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。前兩者IR也高于全部移植sHLA-G陰性胚胎者，分別為30.8%，32.9%和23.0%（P＜0.05）。
　　各中心sHLA-G陽性周期PR與IR均高于sHLA-G陰性周期，其中A,C,E三個中心兩組間PR與IR的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，B中心兩組間的PR和H中心兩組間I

7、R的差異也有統(tǒng)計學(xué)差異。綜合九家中心，sHLA-G陽性周期的PR與IR均高于陰性組（53.9%與%32.5vs37.3%與23.0%，P＜0.05），而兩組間流產(chǎn)率和異位妊娠發(fā)生率均無統(tǒng)計學(xué)差異（6.6%與2.4%vs6.1%與5.1%，P＞0.05）。
　　按受精方式分層分析，IVF組中，sHLA-G陽性周期PR與IR均高于同組的陰性周期（PR:55.0%vs36.1%，IR:33.7%vs22.6%，P＜0.05），ICSI組

8、也觀察到類似的結(jié)果（PR:51.3%vs37.2%,IR:29.4%vs22.6%，P＜0.05）;按年齡段分層分析，年齡≤35歲組與年齡＞35歲組中，sHLA-G陽性周期PR與IR均高于各自的陰性周期（≤35歲組PR：54.6%vs40.0%,IR:34.4%vs25.6%，＞35歲組PR：51.2%vs27.4%,IR:26.0%vs14.9%P＜0.05）；按培養(yǎng)液體系分層分析，Vitrolife組與Quinn’s組中，sHLA-

9、G陽性周期PR和IR分別為56.4%與33.9%（Vitrolife），54.1%與32.9%（Quinn’s）均高于各自的sHLA-G陰性周期（Vitrolife：41.3%與25.2%，Quinn’s：35.0%和21.4%P＜0.05）。
　　全部植入周期的移植胚胎中sHLA-G陽性胚胎占35.6%，高于全部未植入周期移植胚胎中sHLA-G陽性胚胎的百分率19.2%（P＜0.05）。
　　ECs中sHLA-G的表達(dá)與相

10、應(yīng)的胚胎評分行Kendall等級相關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)tau_b=-0.057，P＜0.05，提示兩者之間無相關(guān)關(guān)系。
　　妊娠相關(guān)因素的Logistic多元回歸分析顯示進(jìn)入模型的變量為sHLA-G表達(dá)、年齡和獲卵數(shù)。sHLA-G陽性表達(dá)與妊娠結(jié)局呈正相關(guān)關(guān)系，OR值為2.170，P＜0.05。
　　3.FET前瞻性研究中，實(shí)驗(yàn)組7例患者中6例獲得臨床妊娠（85.7%），對照組25例中13例獲得妊娠（52.0%），兩者相比無統(tǒng)計

11、學(xué)差異(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)組IR為55.6%，高于對照組（27.3%）差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.采用在商品化ELISA試劑盒基礎(chǔ)上改良的電化學(xué)免疫發(fā)光檢測方法，檢測胚胎培養(yǎng)上清sHLA-G敏感度是ELISA的6.28倍，單中心92個IVF周期結(jié)果顯示sHLA-G陽性周期PR和IR分別為51.9%和31.5%，均高于sHLA-G陰性周期（30%與14.9%，P＜0.05）。
　　5.采用人工基因合成技術(shù)合成