高血壓人群中進(jìn)行原發(fā)性醛固酮增多癥的篩查及醛固酮對(duì)脂肪細(xì)胞胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響.pdf

1、第一部分高血壓人群中進(jìn)行原發(fā)性醛固酮增多癥的篩查
　　 目前，ARR已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于PA的篩查。2008年由歐洲內(nèi)分泌學(xué)會(huì)等五個(gè)國際協(xié)會(huì)共同制定的PA診治指南(下稱PA指南)也推薦使用ARR在高血壓人群中進(jìn)行PA的篩查。盡管應(yīng)用ARR在高血壓患者中進(jìn)行PA篩查的研究已長達(dá)20多年，也證實(shí)了其在篩查中具有較好的特異性和敏感性，但目前ARR在PA篩查中的切點(diǎn)尚不一致。同一患者在不同狀態(tài)下ARR也存在很大變異。ARR存在變異是由于受多

2、種因素的影響，從總體上看，可以分成影響ARR的內(nèi)在因素和外在因素兩大方面。內(nèi)在因素包括：RAS的生理調(diào)節(jié)因素(如血鉀等)，年齡、性別和種族，醛固酮分泌的節(jié)律和體位，血壓水平等；外在因素包括藥物，鈉鹽的攝入量，標(biāo)本的采集過程和檢測(cè)方法的特異性和敏感性等?？梢娭挥辛私釧RR的影響因素，并對(duì)可能的影響因素進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，或?qū)Σ煌瑺顟B(tài)下的篩查制定不同的切點(diǎn)，才能有效地進(jìn)行PA的篩查。但目前國內(nèi)外未見對(duì)ARR的影響因素系統(tǒng)研究的報(bào)導(dǎo)。
　　

3、在PA篩查中，不少實(shí)驗(yàn)室也摸索出了各種可能提高ARR篩查的敏感性和特異性的方法，以期提高ARR篩查PA的效率，包括：口服卡托普利后測(cè)定ARR；通過擴(kuò)大PAC在篩查中的作用來提高篩查的效率，如應(yīng)用PAC值的平方與PRA的比值(PAC2/PRA)及PAC值的立方與PRA的比值(PAC3/PRA)代替ARR；直接測(cè)定血漿活性腎素濃度(PRC)取代目前的PRA檢測(cè)等等。另外，由于我國很多醫(yī)療單位未開展PAC和PRA的檢測(cè)，這在一定程度上限制了A

4、RR的使用，故依據(jù)PA的特點(diǎn)尋找更簡單和實(shí)用的，尤其適合廣大基層醫(yī)院進(jìn)行PA篩查的指標(biāo)，具有重要意義。
　　 本研究的主要目的在于：(1)在高血壓人群中進(jìn)行PA的篩查，獲得PA的患病率；(2)探討年齡、體位因素對(duì)ARR的影響；(3)比較不同PA篩查方法的篩查效率。
　　 小結(jié)：
　　 1.本組高血壓人群PA的患病率是10.92％。
　　 2.ARR是PA篩查的有效指標(biāo)，立位1h ARR具有最高的敏感性和特

5、異性，推薦切點(diǎn)為30.82 ng·dl-1/ng·ml-1·h-1。聯(lián)合ARR和PAC作為PA篩查的切點(diǎn)，可以提高ARR篩查的特異性。
　　 3.不同體位下ARR取不同切點(diǎn)可以獲得相近的篩查效率。不同年齡患者的ARR的最佳切點(diǎn)有差異。
　　 第二節(jié)不同篩查方法對(duì)原發(fā)性醛固酮增多癥篩查效率的比較研究
　　 研究方法：
　　 1.入組人群：收集自2006年9月開始至2009年7月，在我院內(nèi)分泌科門診就診和病房

6、住院的原發(fā)性高血壓患者296例。同期診斷的PA患者39例，來自體檢中心的健康志愿者158例。
　　 2.試驗(yàn)過程：試驗(yàn)前準(zhǔn)備同第一部分第一節(jié)。試驗(yàn)前當(dāng)天要求受試者保持坐位15 min后測(cè)量血壓，隨后保持立位1h，期間要求受試者保持安靜。保持立位1h后采血測(cè)定PAC、PRA、PRC、血鈉和血鉀。留取24h尿檢測(cè)尿醛固酮、尿鉀和尿鈉。
　　 3.PA的診斷和分型同第一部分第一節(jié)
　　 4.相關(guān)公式ARR=PAC(ng

7、/dl)/PRA(ng/ml/h)AARR=PAC(ng/dl)/PRC(ng/dl)UARR=Uald(μg/24h)/PRA(ng/ml/h)SUSPUP=血鈉(mmol/L)/尿鈉(mmol/24h)÷血鉀(mmol/L)/尿鉀(mmol/24)SUSPPUP=血鈉(mmol/L)/尿鈉(mmol/24h)÷血鉀2(mmol/L)/尿鉀(mmol/24h)
　　 5.實(shí)驗(yàn)室檢查
　　 PAC、PRA和PRC的檢測(cè)均

8、采用放射免疫法，PAC和PRC試劑盒購自D SL(Texas，USA)、PRA試劑盒購自Diasorin(Minnesota,USA)。血、尿電解質(zhì)測(cè)定采用離子選擇電極法測(cè)定。
　　 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 統(tǒng)計(jì)分析同第一部分第一節(jié)。
　　 小結(jié)：
　　 1. AARR和UARR的PA篩查效率與ARR相當(dāng)。立位1hAARR的推薦切點(diǎn)為42.36ng·dl-1/ng·dl-1，UARR的推薦切點(diǎn)為11.45μ

9、g/d-1/ng·ml-1·h-1。
　　 2.SUSPUP和SUSPPUP的篩查效率與單純使用PAC進(jìn)行篩查的效率相當(dāng)，在沒有條件開展PAC和PRA檢測(cè)的醫(yī)療單位可用于PA的初步篩查，兩者的推薦切點(diǎn)分別為：14.44和4.08。
　　 第二部分：醛固酮與糖代謝異常
　　 臨床和基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，異常增高的醛固酮和糖代謝紊亂有一定的關(guān)系。但醛固酮導(dǎo)致糖代謝異常的機(jī)制尚不明確。近年研究發(fā)現(xiàn)醛固酮可能通過減少胰島素受體底

10、物-1(IRS-1)的表達(dá)而干擾胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。另外，醛固酮的這種作用是通過鹽皮質(zhì)激素受體(MR)抑或糖皮質(zhì)激素受體(GR)尚有爭議。醛固酮與胞漿中的MR結(jié)合后可以產(chǎn)生基因組效應(yīng)和非基因組效應(yīng)，后者的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是廣泛的。醛固酮通過何種途徑導(dǎo)致IRS-1表達(dá)的異常，尚需要進(jìn)一步研究。
　　 本部分研究目的：(1)了解不同糖代謝狀態(tài)下醛固酮水平的差異，并初步探討醛固酮在糖尿病發(fā)生中的作用；(2)探討醛固酮對(duì)胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響，及ER

11、K信號(hào)通路在該效應(yīng)中的作用。
　　 小結(jié)：
　　 1. Uald與FINS和BMI均呈正相關(guān)，SAC與HOMA-IR存在相關(guān)性；
　　 2.不同糖代謝狀態(tài)人群醛固酮和PRA有差異。
　　 第二節(jié)醛固酮在3T3-L1脂肪細(xì)胞中通過鹽皮質(zhì)激素受體影響胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
　　 研究方法：
　　 1.細(xì)胞培養(yǎng)及干預(yù)
　　 3T3-L1前脂肪細(xì)胞在含有10％FBS的高糖DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，

12、在約達(dá)到100％融合后48h換用含0.5M/L3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)、1.7μM/L胰島素、1μM/L地塞米松和10％FBS的高糖DMEM培養(yǎng)液兩天，然后換用含1.7μM/L胰島素和10％FBS的高糖DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)兩天，隨后換用完全培養(yǎng)液培養(yǎng)，約8-10天后細(xì)胞分化成熟。
　　 2.氚標(biāo)葡萄糖攝取率檢測(cè)
　　 各濃度醛固酮處理后的3T3-L1脂肪細(xì)胞分別行基礎(chǔ)葡萄糖攝取率檢測(cè)和胰島素刺激后葡萄糖攝

13、取率檢測(cè)。通過液體閃爍計(jì)數(shù)儀測(cè)定[3H]2-脫氧葡萄糖(2DG)放射活性，并以Bradford法測(cè)定樣品蛋白濃度較正2DG攝取率結(jié)果。最后結(jié)果=樣品每分鐘衰變數(shù)/相應(yīng)蛋白濃度(cpm/mg protein)。
　　 3.實(shí)驗(yàn)分組
　　 完全分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞細(xì)胞分為五組，具體如下。各組3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞后，用含1％FBS的DMEM培養(yǎng)液同步化24h，然后分組處理。C、D、E組先分別采用安

14、體舒通、糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑RU486、ERK1/2磷酸化抑制劑UO126作用30分鐘后，各組同時(shí)加入醛固酮作用24h。采用胰島素(100nM)處理15分鐘后行氚標(biāo)葡萄糖攝取率檢測(cè)和提取細(xì)胞總蛋白。
　　 A組：空白對(duì)照組
　　 B組：醛固酮(10-7M)作用組
　　 C組：醛固酮+安體舒通(10-5M)處理組
　　 D組：醛固酮+RU486(10-5M)處理組
　　 E組：醛固酮+UO126(1

15、0-5M)處理組
　　 (1)以上5組細(xì)胞氚標(biāo)葡萄糖攝取率檢測(cè)
　　 (2)以上5組細(xì)胞分別提取細(xì)胞總蛋白，Western Blot方法檢測(cè)胰島素刺激后的IRS-1，AKT蛋白ERK1/2蛋白、gsk-3β表達(dá)及其磷酸化。
　　 4.統(tǒng)計(jì)分析
　　 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布或經(jīng)轉(zhuǎn)換后呈正態(tài)分布者用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，三組間比較采用單因素方差分析，方差齊性則兩兩比較采用最小有意義差異LSD法檢驗(yàn)。顯著性水準(zhǔn)為P

16、小于0.05。統(tǒng)計(jì)分析在SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包上完成。
　　 小結(jié)：
　　 1.醛固酮可以抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素刺激的葡萄糖攝取率，這種作用呈現(xiàn)醛固酮?jiǎng)┝恳蕾囆浴?br>　　 2.醛固酮主要通過減少3T3-L1脂肪細(xì)胞的IRS-1表達(dá)、AKT磷酸化和ERK1/2磷酸化，影響胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
　　 3.醛固酮在3T3-L1細(xì)胞中至少部分通過MR引起胰島素刺激的葡萄糖攝取率下降，與GR無關(guān)，與ERK1/