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1、目的:制備硫酸長(zhǎng)春堿聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒(VBL-PBCA-NP),對(duì)該納米粒進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè),研究該納米粒對(duì)大鼠C6腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的抑制作用,并對(duì)該納米粒進(jìn)行安全性檢測(cè)。 方法:①乳化聚合法制備VBL-PBCA-NP,透射電子顯微鏡觀察其形態(tài)特征,馬爾文粒度分析儀測(cè)定粒徑及分布,紫外分光光度計(jì)法檢測(cè)其包封率及載藥量。②利用MTT法及生長(zhǎng)曲線法對(duì)比測(cè)定VBL-PBCA-NP及VBL對(duì)大鼠C6腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖抑制作用;利用克
2、隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定該納米粒對(duì)單個(gè)細(xì)胞克隆形成能力的影響;通過(guò)HE染色及掃描電子顯微鏡分別觀察VBL-PBCA-NP對(duì)細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞表面超顯微結(jié)構(gòu)的影響,并與VBL進(jìn)行比較。通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)VBL-PBCA-NP及VBL對(duì)細(xì)胞周期及凋亡的影響。③MTT法比較檢測(cè)VBL-PBCA-NP及VBL對(duì)原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞的毒性;通過(guò)溶血性試驗(yàn)及急性毒性試驗(yàn)對(duì)該納米粒進(jìn)行安全性檢測(cè)。 結(jié)果:①制備的VBL-PBCA-NP平均粒徑是74.4nm
3、,包封率為78.47%,載藥量為38.23%,納米粒分布均勻,無(wú)粘連,粒徑分布范圍較窄。②MTT結(jié)果表明:VBL濃度在0.5~5000μg/L范圍內(nèi),VBL-PBCA-NP能明顯抑制大鼠C6腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。在相同的VBL濃度及培養(yǎng)條件下,VBL-PBCA-NP比VBL具有更強(qiáng)的抗腫瘤作用。VBL-PBCA-NP能顯著抑制大鼠C6腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),與VBIL組相比,VBL-PBCA-NP組的增長(zhǎng)抑制率顯
4、著提高(P<0.05)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,VBL-PBCA-NP組的誘導(dǎo)凋亡作用明顯強(qiáng)于VBL組,細(xì)胞大量停留在G2期,細(xì)胞分裂受阻。而克隆形成實(shí)驗(yàn)也表明:VBL-PBCA-NP作用后的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的分裂增值能力顯著低于VBL組(P<0.05)。HE染色顯示,同樣的藥物濃度作用下,VBL-PBCA-NP組更容易引起細(xì)胞數(shù)量減少,凋亡明顯。掃描電子顯微鏡觀察結(jié)果顯示:VBL-PBCA-NP及VBL組均能引起大鼠C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞胞
5、膜內(nèi)折,形成凋亡小體。③VBL-PBCA-NP的半數(shù)致死量是26.377mg/Kg,95%的可信限=21.868~33.249mg/Kg。VBL的半數(shù)致死量是22.7 mg/Kg,95%的可信限=18.815~27.762mg/Kg。MTT實(shí)驗(yàn)顯示,VBL-PBCA-NP比VBL對(duì)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞有著較低的細(xì)胞毒性作用,能夠有效緩和長(zhǎng)春堿藥物注射造成的體重減輕及器官衰竭現(xiàn)象。 結(jié)論:制備得到的VBL-PBCA-NP粒徑分布均勻,
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