CD40單克隆抗體聯(lián)合免疫細胞治療直腸癌的實驗研究.pdf

1、研究背景:結(jié)直腸癌是消化道常見惡性腫瘤之一,患者經(jīng)傳統(tǒng)治療5年生存率仍不理想。目前過繼性細胞免疫治療已成為繼手術(shù)、放療、化療后第四大抗腫瘤治療手段,在延長患者生存期和改善生活質(zhì)量方面具有獨特的優(yōu)勢。如何進一步增強免疫細胞對腫瘤的特異性殺傷活性,提高整體療效始終是研究者們關(guān)注的重點。機體抗腫瘤免疫主要是T細胞介導(dǎo)的腫瘤特異性免疫,而樹突狀細胞(dendriticcell,DC)的激活在細胞免疫應(yīng)答中占據(jù)重要地位。國內(nèi)外最新研究提示,CD4

2、0單克隆抗體可以更有效的活化DC。然而,應(yīng)用CD40單抗激活DC,進一步誘導(dǎo)腫瘤特異性T細胞治療直腸癌的相關(guān)研究在國內(nèi)外未見報道。
　　研究目的:觀察4株新型鼠抗人CD40單克隆抗體與不同細胞的結(jié)合率;篩選出與DC高親和性抗體及最適濃度,以此激活DC進而誘導(dǎo)腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞(CTL),觀察其對人直腸癌細胞的體內(nèi)外抗腫瘤作用。
　　研究方法:1)應(yīng)用流式細胞儀檢測不同細胞與4株新型鼠抗人CD40單克隆抗體的親和性;

3、篩選DC與4株鼠抗人CD40單克隆抗體的最適結(jié)合濃度;2)流式細胞儀檢測不同條件激活的DC表型及細胞因子分泌情況。3)將常規(guī)激活方法和不同株CD40單抗激活的DC與T細胞混合培養(yǎng),誘導(dǎo)腫瘤特異性CTL產(chǎn)生,同時培養(yǎng)細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞(cytokine-inducedkiller,CIK)作為對照,ELISA法檢測各組CTL和CIK共培養(yǎng)上清中IFN-γ的分泌量;并應(yīng)用LDH釋放法檢測各組CTL和CIK細胞的體外抗腫瘤活性。4)將SW

4、-620人直腸癌細胞注射至裸鼠腋窩皮下構(gòu)建裸鼠荷瘤模型。5)將荷瘤裸鼠分組經(jīng)尾靜脈分別注射不同制劑進行治療:A組生理鹽水;B組CD40單抗E11;C組常規(guī)方法誘導(dǎo)的CTL;D組E11激活的DC所誘導(dǎo)的CTL(E11-DC-CTL);E組CD40單抗E11聯(lián)合E11-DC-CTL。治療2個療程后處死小鼠,分析抑瘤效果。
　　研究結(jié)果:1)流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)人PBMC、DC、B淋巴細胞、巨噬細胞均可與四株鼠抗人CD40單克隆抗體結(jié)合,

5、而人T淋巴細胞、BGC-823人胃癌細胞、LS-174T人結(jié)腸癌細胞及EVC細胞不能與之結(jié)合;人DC在四株單抗?jié)舛葹?μg/ml時結(jié)合率即可達90％以上,處于飽和狀態(tài);2)單抗E11參與激活的DC表面CD80、CD86、CD83及HLA-DR的表達及培養(yǎng)上清中IL-12含量均顯著高于對照組及其余三株單抗組;3)效靶比為5:1和10:1時,E11-DC-CTL組8h殺傷率顯著優(yōu)于其余各組;4)裸鼠左側(cè)腋窩皮下瘤模型構(gòu)建成功,第10天時致瘤

6、率達100%;5)體內(nèi)抑瘤實驗:CTL治療組抑瘤率顯著高于E11單抗注射組,其中E11-CTL和E11+E11-CTL均優(yōu)于常規(guī)CTL組,但兩組間抑瘤率差異不顯著。
　　研究結(jié)論:1)四株鼠抗人CD40單克隆抗體均可與人PBMC、DC、B細胞、巨噬細胞特異性結(jié)合,但不與腫瘤細胞和血管內(nèi)皮細胞結(jié)合。2)CD40單抗E11激活DC,可以顯著上調(diào)DCs表面共刺激分子的表達,并促進DC分泌更多IL-12。3)常規(guī)誘導(dǎo)CTL對腫瘤細胞的體外