p38-HSP27信號通路介導(dǎo)ATP缺失時(shí)腎小管上皮細(xì)胞肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重構(gòu)作用的研究.pdf

1、以往的研究證實(shí)，缺血性腎損傷時(shí)腎小管上皮細(xì)胞肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重構(gòu)是導(dǎo)致腎功能受損加重的重要原因，但缺血性腎損傷時(shí)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重構(gòu)的具體機(jī)制尚不清楚。本研究模擬腎臟的缺血狀態(tài)，在建立細(xì)胞體外ATP缺失模型的基礎(chǔ)上，研究ATP缺失時(shí)腎小管上皮細(xì)胞肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重構(gòu)情況及肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重構(gòu)的可能機(jī)制，以期為缺血性腎損傷的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。根據(jù)既往的研究結(jié)果，我們推測p38-HSP27信號通路可能參與了ATP缺失時(shí)腎小管上皮細(xì)胞肌動(dòng)

2、蛋白細(xì)胞骨架的重構(gòu)過程。 本研究選用大鼠近端’腎小管上皮細(xì)胞系(NRK52E細(xì)胞)，用熒光染色法觀察ATP缺失后肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的重構(gòu)情況；用免疫印跡法研究細(xì)胞內(nèi)p38激酶的表達(dá)及活性的改變，同時(shí)分析HSP27的表達(dá)、磷酸化水平及其在細(xì)胞內(nèi)定位的改變。F-肌動(dòng)蛋白熒光染色結(jié)果表明，ATP缺失后NRK52E細(xì)胞肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架明顯重構(gòu)， F-肌動(dòng)蛋白的含量顯著增高，并與ATP缺失處理時(shí)間相關(guān)。 該結(jié)果說明ATP缺失后肌動(dòng)蛋

3、白細(xì)胞骨架發(fā)生了聚合的重構(gòu)變化。蛋白免疫印跡結(jié)果表明，ATP缺失后p3 8激酶迅速激活，HSP27磷酸化顯著加強(qiáng)，且HSP27出現(xiàn)了從骨架成分到胞漿成分的重分布現(xiàn)象。運(yùn)用p38激酶的抑制劑SB203580預(yù)處理細(xì)胞之后，p38激酶的活性得以明顯抑制，HSP27的磷酸化也被顯著抑制，HSP27的重分布現(xiàn)象也得以逆轉(zhuǎn)；同時(shí)ATP缺失所致的肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重構(gòu)現(xiàn)象得以部分逆轉(zhuǎn)，ATP缺失所致的F-肌動(dòng)蛋白含量的增高也被顯著抑制。本研究結(jié)果表明