雷公藤多甙聯(lián)合阿魏酸鈉對大鼠膠原誘導關節(jié)炎及滑膜RANKL-OPG表達的影響.pdf

1、目的：類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一種慢性自身免疫性疾病，其主要病變在關節(jié)，關節(jié)內(nèi)可見滑膜組織異常增生、大量炎性細胞浸潤以及軟骨與骨進行性破壞[1]。軟骨和骨破壞是RA致殘的主要原因。雷公藤多甙(Tripterygium Glycoside，TG)是傳統(tǒng)抗風濕中藥雷公藤的提取物，是其免疫抑制和抗炎作用的主要有效成分。阿魏酸鈉(Sodium Ferulate，SF)是中藥當歸和川芎的有效成分，具有改善循

2、環(huán)、抗氧化等作用。本課題擬在建立大鼠膠原誘導關節(jié)炎(Collagen-induced arthritis，CIA)的基礎上，通過觀察雷公藤多甙與阿魏酸鈉配伍對大鼠CIA的抑制作用，并檢測大鼠血清腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白細胞介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)、一氧化氮(Nitric oxide，NO)、誘導型一氧化氮合酶(Induced nitric oxide

3、 synthases，iNOS)水平及滑膜核因子-κB受體活化因子配體(Receptoractivator of NF-κB ligand，RANKL)和骨保護素(Osteoprotegerin OPG)的表達，探討中藥有效成分配伍對CIA的治療作用及骨保護機制，為進一步臨床應用提供實驗依據(jù)。 方法：選擇體重130-150g的Wistar大鼠，雌雄各半，留取8只作正常組，其余大鼠用于制作CIA模型；于大鼠尾根部、右足跖及背部多處

4、皮內(nèi)注射雞Ⅱ型膠原溶液共0.2ml，第14d加強免疫一次。在造模后第21d，將成模大鼠分成模型組、TG組、SF組、TG+SF組，每組8只，除模型組外，其余各組每天給藥一次，持續(xù)28d；在造模前、用藥前及停藥后觀察大鼠的一般情況，測量體重及大鼠后足爪厚度，評價關節(jié)炎指數(shù)(AI)。停藥后，腹主動脈取血處死，留取血清待檢，取大鼠踝關節(jié)進行固定。應用放射免疫法(RIA)測定血清TNF-α、IL-1β水平，硝酸還原酶法測定血清NO水平，并測血清i

5、NOS水平。對大鼠關節(jié)進行脫鈣、脫水、包埋，切片，行蘇木素-伊紅(HE)染色，光鏡下觀察關節(jié)病理變化并進行評分。對滑膜組織進行RANKL/OPG蛋白表達的免疫組織化學檢測，并采用計算機圖像分析系統(tǒng)對其表達量進行分析。所有數(shù)據(jù)均應用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析，所得結(jié)果均用x±s表示。組間均數(shù)比較采用單因素方差(one-way ANOVA)分析。 結(jié)果： 1雷公藤多甙聯(lián)合阿魏酸鈉對CIA大鼠一般情況的影響CIA大鼠于

6、造模后第10d開始出現(xiàn)關節(jié)腫脹，第14d達到高峰，二次加強免疫后腫脹更加明顯；第21d造模大鼠重明顯減少，與正常組比較有顯著性差異(P＜0.05)；隨著病程進展，AI及足爪腫脹厚度逐漸增加，在造模后第28d達到高峰，與正常組相比有顯著性差異(P＜0.05)；給藥28d后各用藥組兩者均下降，與模型組相比有顯著性差異(P＜0.05)；配伍組又明顯低于TG組和SF組(P＜0.05)；模型組與正常組相比有顯著性差異(P＜0.01)。 2

7、雷公藤多甙聯(lián)合阿魏酸鈉對CIA大鼠血清TNF-α、IL-1β水平的影響模型組和各用藥組血清TNF-α、IL-1β水平均明顯高于正常組(P＜0.05)；模型組和SF組明顯高于TG組和配伍組(P＜0.05)；TG組明顯高于配伍組(P＜0.05)；模型組和SF組無顯著性差異(P＞0.05)。 3雷公藤多甙聯(lián)合阿魏酸鈉對CIA大鼠血清NO、iNOS水平的影響模型組、TG組和SF組血清NO、iNOS水平明顯高于正常組和配伍組(P＜0.05

8、)；模型組明顯高于TG組和SF組(P＜0.05)；TG組和SF組無顯著性差異(P＞0.05)；配伍組和正常組無顯著性差異(P＞0.05)。 4雷公藤多甙聯(lián)合阿魏酸鈉對CIA大鼠關節(jié)組織病理的影響病理結(jié)果表示，模型組大鼠關節(jié)滑膜組織有大量炎性細胞浸潤，關節(jié)面不完整，有血管翳形成；用藥組滑膜組織炎性細胞浸潤減輕，骨破壞程度降低。模型組和各用藥組病理積分均明顯高于正常組(P＜0.05)；模型組明顯高于各用藥組(P＜0.05)；TG組和

9、SF組明顯高于配伍組(P＜0.05)；TG組和SF組無顯著性差異(P＞0.05)。 5雷公藤多甙聯(lián)合阿魏酸鈉對CIA大鼠滑膜組織RANKL和OPG表達的影響免疫組化染色顯示，模型組和各用藥組關節(jié)滑膜組織RANKL、OPG表達量及RANKL/OPG比值明顯高于正常組(P＜0.05)；模型組和SF組明顯高于TG組和配伍組(P＜0.05)；TG組明顯高于配伍組(P＜0.05)；模型組與SF組無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論

10、： 1雷公藤多甙與阿魏酸鈉聯(lián)合應用對大鼠膠原誘導關節(jié)炎具有顯著治療作用，且療效優(yōu)于單用雷公藤多甙，提示阿魏酸鈉對雷公藤多甙治療CIA具有增效作用。 2雷公藤多甙治療CIA的作用機制與降低血清中前炎性細胞因子TNF-α、IL-1β及NO、iNOS水平，下調(diào)滑膜RANKL表達及RANKL/OPG比值等因素有關。 3阿魏酸鈉對雷公藤多甙增效作用的可能機制包括：通過降低NO、iNOS水平，減輕骨破壞；通過改善全身及關節(jié)局