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1、目的采用脂質(zhì)體法將抗人血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)發(fā)卡狀核酶轉(zhuǎn)染肝癌細胞，研究抗人VEGF發(fā)卡狀核酶對肝癌細胞SMMC-7721生物學(xué)特性和裸鼠肝癌移植瘤的影響。 方法合成針對人VEGF的發(fā)卡狀核酶(以下簡稱RZ)，定向克隆于真核表達載體pcDNA3．1+中；經(jīng)雙酶切和測序鑒定后，用脂質(zhì)體法將pcDNA3．I+／RZ轉(zhuǎn)染8MMC-772l肝癌細胞，經(jīng)G418(500p．g／m1)加壓篩選獲得抗性細胞株，基因組DNA法和RT-PC
2、R法鑒定其在肝癌細胞內(nèi)的表達；MTT法分析RZ對SMMC-7721肝癌細胞增殖的影響，半定量RT-PCR法和ELISA法觀察對SMMC-7721肝癌細胞VEGF表達的影響；用FCM分析其對SMMC-7721細胞凋亡的影響。接種RZ組和空載體組肝癌細胞于裸鼠皮下，觀察成瘤時間、腫瘤體積和重量變化，免疫組化法觀測腫瘤組織微血管變化及VEGF表達變化。 結(jié)果獲得pcDNA3．I+／RZ重組真核表達載體和SMMC-7721／RZ轉(zhuǎn)基因細
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