高濃度紫杉醇誘導胞質空泡化樣細胞死亡的分子機制研究.pdf

1、細胞死亡方式有多種類型，包括壞死、凋亡、自噬、有絲分裂災變、脹亡、衰老樣的細胞死亡和副凋亡等。高濃度紫杉醇誘導的胞質空泡化樣細胞死亡是我們小組最近觀察到的一種新的細胞死亡現(xiàn)象，該將其歸類于哪種細胞死亡方式尚無定論，其分子機制幾乎完全未知。本論文對高濃度紫杉醇誘導的胞質空泡化樣細胞死亡現(xiàn)象的形態(tài)指標、生化指標等特征進行了研究，基于這些特征探討了這一死亡現(xiàn)象的分類歸屬；然后研究了這種死亡方式的分子機制；最后初步探討了利用紫杉醇誘導空泡化的機

2、制在體腫瘤治療的可能性。本研究加深了人們對這種細胞死亡方式的認識，同時也為將紫杉醇誘導空泡化的機制用于臨床提供理論指導。
　　 本文第一章緒論部分概述了不同細胞死亡方式的主要特征和紫杉醇誘導不同細胞死亡方式的研究現(xiàn)狀，同時說明了本論文的研究目的和意義。
　　 本論文實驗部分主要分為三部分：
　　 第一部分：利用共聚焦顯微鏡、流式細胞儀和Western Blot等技術研究了高濃度紫杉醇誘導胞質空泡化樣細胞死亡的特征

3、，結果如下：1）高濃度紫杉醇誘導的胞質空泡化樣細胞死亡的沒有細胞皺縮反而腫脹，沒有凋亡小體形成，沒有細胞核斷裂，磷脂酰絲氨酸不外翻，對caspase廣譜抑制劑不敏感，caspase 3不活化等，這些實驗結果都表明高濃度紫杉醇誘導的細胞死亡現(xiàn)象不是凋亡；2）高濃度紫杉醇誘導的細胞死亡中細胞核沒有多個微小細胞核的形成也不符合有絲分裂災變的特征；3）PI染色顯陰性，說明細胞膜完整性沒有破壞，不符合壞死和脹亡的特征；4）衰老相關β半乳糖苷酶活性

4、檢測顯陰性，不符合衰老性細胞死亡的特征；5）然而卻符合副凋亡的這些主要特征：衍生于內質網(wǎng)的細胞質空泡化、線粒體腫脹、沒有凋亡小體、沒有核斷裂、caspase不活化、不被caspase的抑制劑抑制等。所以我們認為高濃度紫杉醇誘導的胞質空泡化樣細胞死亡現(xiàn)象應歸屬于副凋亡。
　　 第二部分：利用共聚焦顯微鏡和Western Blot等技術研究了高濃度紫杉醇誘導副凋亡的分子機制：1）利用蛋白質合成抑制劑放線菌酮（CHX）研究確定了高濃度

5、紫杉醇誘導的細胞副凋亡不需要蛋白質合成的參與；2）MAPK途徑包括三各成員MEK、JNK、P38，分別利用MEK、JNK、P38的專一性抑制劑，研究了這三條途徑在高濃度紫杉醇誘導的細胞死亡和細胞質空泡化中的作用，并通過Western Blot研究了ERK、JNK和P38的活化情況。最后證明高濃度紫杉醇誘導的細胞副凋亡不需要MAPK途徑參與；3）利用總的活性氧（ROS）的清除劑研究了ROS在高濃度紫杉醇誘導胞質空泡化中的作用，表明高濃度紫

6、杉醇不是通過ROS誘導空泡化產生的；4）共轉Bcl-xl-YFP和er-RFP共聚焦顯微鏡動態(tài)實時觀察Bcl-xl和內質網(wǎng)的相對空間位置變化，表明Bcl-xl圍繞在腫脹的內質網(wǎng)周圍。但是Bcl-xl的抑制劑HA14-1卻沒有抑制高濃度紫杉醇誘導的空泡化，Bcl-xl在高濃度紫杉醇誘導的空泡化中的作用還有待進一步研究。
　　 第三部分：在Balb/c小鼠皮下種植腫瘤，然后通過在體瘤內注射紫杉醇的方式利用電鏡技術研究確定了紫杉醇在體