清熱祛濕法對膽汁淤積大鼠的作用及肝臟膜轉(zhuǎn)運(yùn)體Mrp2變化規(guī)律的研究.pdf

1、膽汁淤積(cholestasis)是由多種原因所致的膽汁分泌或排泄障礙，導(dǎo)致膽汁不能正常流入十二指腸，從而反流入血液中。臨床上常表現(xiàn)為黃疸，瘙癢，尿色深，糞色變淺或黃斑瘤等，實(shí)驗(yàn)室檢查可有血清膽紅素，堿性磷酸酶(ALP)，5。核苷酸酶和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)水平升高，血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)提示有肝細(xì)胞損傷，慢性膽汁淤積常有總膽固醇水平升高。膽汁淤積(cholestasis)不是一種疾病，而是一組疾病共同

2、的臨床癥狀，故稱為膽汁淤積綜合征更為恰當(dāng)。該綜合征在臨床上常見。隨著對膽汁分泌和排泄的分子機(jī)制認(rèn)識的不斷深入，對膽汁淤積概念的理解也有了新的拓展。傳統(tǒng)觀念認(rèn)為膽汁淤積是肝內(nèi)、外梗阻因素造成膽汁形成后流動受阻，這種僅僅基于解剖學(xué)上的理解顯然是不全面的。目前認(rèn)為膽汁淤積是指膽汁生成障礙和(或)膽汁流動障礙。盡管對膽汁淤積性肝病分子機(jī)制的認(rèn)識取得了一些進(jìn)展，不同病因所致膽汁淤積的分子機(jī)制正逐步得以闡明，但膽汁淤積(尤其是肝內(nèi)膽汁淤積)的治療尚

3、未獲得根本性突破。如何從分子水平深入理解和開展膽汁淤積的藥物治療，仍是肝病學(xué)者面對的艱難課題。 目的：觀察都具有清熱祛濕功效的三個中藥復(fù)方茵陳蒿湯、茵陳五苓散與大柴胡湯對膽汁淤積性肝纖維化大鼠的藥理作用及肝臟膜轉(zhuǎn)運(yùn)體Mrp2變化規(guī)律的研究。 方法：采用肝外膽管結(jié)扎(BDL)和α-萘異硫氰酸酯(ANIT)灌胃方法誘導(dǎo)大鼠肝損傷，形成膽汁淤積性肝纖維化模型，以茵陳蒿湯、茵陳五苓散與大柴胡湯進(jìn)行灌胃治療，分別在造模后取四個時相

4、點(diǎn)(BDL模型分別在造模后第3天，1周，2周，3周/ANIT模型于造模后第24，48，72，96小時)動態(tài)觀測實(shí)驗(yàn)性大鼠一般情況，肝腎功能變化，肝組織病理學(xué)變化和纖維化程度以及三種中藥方劑的干預(yù)的作用。 結(jié)果： 1.與假手術(shù)組比較，BDL模型組大鼠的體重都有不同程度的降低；肝重，脾重，肝指數(shù)，脾指數(shù)呈增高的動態(tài)變化：通過對造模后3天，1周，2周，3周的大鼠肝臟HE染色病理學(xué)形態(tài)觀察和天狼星紅膽染色對肝臟膠原纖維的觀察，結(jié)

5、扎3天后，匯管區(qū)已有膽管增生，至3周時增生逐漸加重；血清Alb含量持續(xù)下降；而GLO、TP含量先高后低的變化；TBil含量，GGT、ALP活性呈持續(xù)增高；ALT活性，TBA、CHE含量在造模3天后即顯著增高，此后有所下降，至3周末仍高于假手術(shù)組(P<0.01，P<0.05)，AST在3天后即顯著增高并維持至3周末。LDH活性在造模1周時顯著增高，即后有所下降；RUN含量在造模后前2周無明顯改變，至第3周有所增高；CRE含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6、 2.在BDL模型中，與模型組比較，所有用藥干預(yù)組體重、肝重、肝/體重比值都有所降低，但統(tǒng)計(jì)學(xué)無意義，脾重、脾/體重比值顯著降低(P<0.05)；三個用藥干預(yù)組膽管樣上皮細(xì)胞或小膽管明顯減少，肝細(xì)胞相對變多，膠原纖維增生減少，肝組織纖維化程度減輕，尤以茵陳蒿湯組療效明顯；茵陳蒿湯組ALB含量、LDH活性增加：各藥物干預(yù)組TBil、TBA含量及ALP活性均降低；茵陳蒿湯組和茵陳五苓散組TBA含量、GGT活性顯著降低(P<0.01)

7、。 3.與正常組比較，ANIT模型組大鼠的體重都有不同程度的降低，肝重，肝指數(shù)呈增高的動態(tài)變化，脾重，脾指數(shù)先增高后在造模72h時降低的動態(tài)變化；造模后24h匯管區(qū)就有膽管上皮細(xì)胞增生，少量炎性細(xì)胞浸潤，72h時膽管上皮細(xì)胞增生范圍增大，膠原纖維增生，96h增生的小膽管樣上皮細(xì)胞開始縮小；Alb含量下降，96h接近正常水平：GLO、TP、CHE含量無明顯變化： TBil、TBA含量，ALT、AST活性24h和72h時明顯增高(P

8、<0.05)，48h和96h接近正常；ALP、GGT顯著增高(P<0.05)，96h時接近正常：LDH活性顯著下降(P<0.05)，96h升高；RUN含量24h時下降，即后增高接近正常水平；CRE含量在48h，72h時增高(P<0.05)，96h時恢復(fù)正常：肝組織Mrp2轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在正常組肝臟組織的Mrp2陽性表達(dá)量最多，在模型組24h、48h、72h的Mrp2的陽性表達(dá)量逐漸減少，在模型組96小時Mrp2的陽性表達(dá)量增多。 4.

9、在ANIT模型中，所有用藥干預(yù)組體重，肝重顯著降低，茵陳蒿湯、大柴胡湯的肝/體重比值顯著降低(P<0.05)，茵陳五苓散的肝/體重比值，所有用藥干預(yù)組脾重也有所降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比，三個用藥干預(yù)組膽管樣上皮細(xì)胞或小膽管明顯減少，肝細(xì)胞相對變多，膠原纖維增生減少，肝組織纖維化程度減輕，尤以茵陳蒿湯組療效明顯；肝組織Mrp2轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在三個用藥干預(yù)組都增多，尤其是茵陳蒿湯最明顯(P<0.05)。 結(jié)論： 1.無論

10、是BDL模型還是ANIT模型，膽汁淤積性大鼠肝纖維化模型主要病理改變有膽汁淤積、膽管上皮細(xì)胞增生、肝細(xì)胞減少、膠原增生和沉積，與新生的膽管上皮細(xì)胞關(guān)系密切。 2.進(jìn)一步證實(shí)了理論上成立的膽汁淤積性疾病的發(fā)病機(jī)制與多藥耐藥相關(guān)蛋白2(Mrp2)的表達(dá)有關(guān)。 3.都具有清熱祛濕功效的茵陳蒿湯，茵陳五苓散，大柴胡湯有較為顯著的抗大鼠實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的作用，且以茵陳蒿湯治療效果最好，從試驗(yàn)結(jié)果來以方測證，膽汁淤積性疾病以熱重于濕的