ESAT-6、CFP-10及rCFP10-ESAT6在艾滋病合并結核桿菌感染診斷價值中的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構建結核重組抗原ESAT-6、CFP-10及融合抗原rCFP10-ESAT6原核表達載體,經(jīng)IPTG誘導表達,并在大腸埃希菌進行原核表達。獲得純化的蛋白產物,通過檢測三者作為抗原刺激物在HIV感染者中的特異性T細胞反應,為建立艾滋病合并結核感染的診斷方法提供科學的實驗依據(jù)。 方法:應用融合PCR(Fusion PCR)技術,從結核分枝桿菌基因組(HB37v)中成功克隆獲得ESAT-6、CFP-10基因及rCFP10-ESA

2、T6融合基因,連接到pGEM-T載體,測序正確后插入至原核表達載體pET-32a(+)和pET-28a(+)中,轉化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導表達,親和層析法純化重組蛋白及融合蛋白；通過十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、Western blotting免疫印跡分析、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)證實表達蛋白抗原特異性；并將三種純化好的表達蛋白作為抗原,以健康者、確診的活動性結核患者分別作為陰性對照、

3、陽性對照,采用酶聯(lián)免疫斑點技術(enzyme-linked immuno-spot,Elispot)檢測HIV感染者中特異性T細胞反應,通過患者外周血干擾素-γ分泌量的測定,判斷其是否合并結核桿菌感染。 結論:利用大腸埃希菌BL21(DE3)成功表達、純化了具有良好抗原性的ESAT-6、CFP-10重組蛋白和rCFP10-ESAT6融合蛋白,并以三種蛋白分別作為抗原刺激物,利用Elispot方法對HIV合并結核感染進行檢測,為早

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