空心硅納米粒子光敏劑在光動(dòng)力治療膽管癌中的作用及機(jī)制.pdf

1、目的:
　　1、制備負(fù)載光敏劑Photosan的空心氧化硅納米粒子(以下簡(jiǎn)稱納米化Photosan)，并初步探討納米化Photosan的藥物安全性。
　　2、探索并比較Photosan及納米化Photosan介導(dǎo)的光動(dòng)力療法(Photodynamic Therapy，PDT)在體外試驗(yàn)中對(duì)膽管癌的療效。
　　3、探索并比較Photosan及納米化Photosan介導(dǎo)的PDT在體內(nèi)試驗(yàn)中對(duì)膽管癌的療效。
　　4、探

2、索并比較Photosan及納米化Photosan介導(dǎo)的PDT抑制膽管癌生長(zhǎng)的可能途徑。
　　方法:
　　1、采用一步濕化學(xué)方法制備負(fù)載Photosan的空心氧化硅納米粒子。
　　2、體外實(shí)驗(yàn)中，用MTT法檢測(cè)Photosan及納米化Photosan介導(dǎo)的PDT對(duì)人膽管癌QBC939細(xì)胞的殺傷作用。觀察不同的光敏劑孵育時(shí)間、光敏劑濃度，及光照劑量對(duì)PDT效果的影響，并了解這兩種光敏劑的暗毒性，比較其藥效差異。用流式細(xì)胞計(jì)

3、數(shù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步觀察兩種光敏劑應(yīng)用于PDT的效果，并比較它們之間的差異。光學(xué)顯微鏡下觀察PDT前后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。
　　3、建立裸鼠人膽管癌移植瘤模型，觀察Photosan及納米化Photosan介導(dǎo)的PDT對(duì)腫瘤的抑制作用及它們之間的差異。觀察光敏劑對(duì)動(dòng)物有無(wú)毒副作用。病理切片下觀察PDT后腫瘤組織細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。
　　4、檢測(cè)裸鼠腫瘤PDT治療后對(duì)其血管生成、侵襲能力及細(xì)胞凋亡的影響，并對(duì)比兩種光敏劑間的區(qū)別。所用方法為

4、用PCR、westem-blot、免疫組化等檢測(cè)相關(guān)基因在mRNA和蛋白表達(dá)的水平的區(qū)別。
　　結(jié)果:
　　1、成功制備了負(fù)載Photosan的空心氧化硅納米粒子，實(shí)現(xiàn)了光敏劑Photosan的納米化。
　　2、MTT法結(jié)果顯示Photosan及納米化Photosan介導(dǎo)的PDT均對(duì)膽管癌細(xì)胞有明顯的殺傷作用(P＜0.05)，而后者的殺傷作用更強(qiáng)(P＜0.05)。光動(dòng)力作用在一定范圍內(nèi)與光敏劑的孵育時(shí)間、光敏劑的濃度及

5、光照劑量均呈正相關(guān)的關(guān)系。兩種光敏劑均無(wú)明顯的暗毒性，但兩者具有不同的最佳作用參數(shù)。納米化Photosan的最佳作用參數(shù)中，其所需的光敏劑濃度更低，孵育時(shí)間更短。Photosan及納米化Photosan的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)顯示，使用各自的最佳作用參數(shù)時(shí)，后者的細(xì)胞殺傷效果明顯強(qiáng)于前者(P＜0.05)。兩者對(duì)細(xì)胞殺傷的途徑均以誘導(dǎo)凋亡為主，而后者中細(xì)胞壞死的比例高于前者。光學(xué)顯微鏡下亦可觀察到納米化Photosan對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用更強(qiáng)，

6、且壞死細(xì)胞的比例更高。
　　3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在使用各自的最佳作用參數(shù)時(shí)，Photosan與納米化Photosan介導(dǎo)的PDT均對(duì)膽管癌有明顯的抑制作用(P＜0.05)，而后者作用更強(qiáng)(P＜0.05)。病理切片結(jié)果亦顯示，后者對(duì)腫瘤的殺傷效果更為明顯。
　　4、Photosan及納米化Photosan介導(dǎo)的PDT作用于膽管癌后，與腫瘤血管生成、侵襲能力相關(guān)的基因在mRNA及蛋白水平的表達(dá)均下調(diào)(P＜0.05)，與細(xì)胞凋亡

7、相關(guān)的基因表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)。且后者相較于前者，對(duì)腫瘤侵襲能力及細(xì)胞凋亡的影響更為強(qiáng)烈(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、采用一步濕化學(xué)方法可制備出負(fù)載Photosan的空心氧化硅納米粒子，實(shí)現(xiàn)光敏劑Photosan的納米化，且納米化Photosan無(wú)明顯毒性。
　　2、Photosan及納米化Photosan介導(dǎo)的PDT均對(duì)膽管癌細(xì)胞具有明顯的殺傷作用，而后者的殺傷作用更強(qiáng)。光動(dòng)力作用在一定范圍內(nèi)與光敏劑的

8、孵育時(shí)間、光敏劑的濃度及光照劑量均呈正相關(guān)的關(guān)系。納米化Photosan較之于普通Photosan，帶來(lái)的光動(dòng)力效應(yīng)更強(qiáng)，達(dá)到有效治療濃度的速率更快。
　　3、Photosan及納米化photosan介導(dǎo)的PDT均在裸鼠人膽管癌移植瘤模型上證實(shí)具有明顯的治療作用，且Photosan納米化后可縮短給藥——光照時(shí)間間隔，增強(qiáng)光動(dòng)力效應(yīng)。
　　4、Photosan及納米化Photosan介導(dǎo)的PDT治療腫瘤的機(jī)制至少包括了三個(gè)方面