再生障礙性貧血患者PIG-A基因突變和IL-3、IL-8變化的研究.pdf

1、目的：①研究再生障礙性貧血（aplastic anemia,AA）患者PIG-A基因的突變及與AA發(fā)病的關(guān)系。②檢測(cè)AA患者外周血白細(xì)胞上糖基磷脂酰肌醇錨蛋白的表達(dá)，初步探討PIG-A基因突變與CD55、CD59的表達(dá)變化的關(guān)系。③檢測(cè)AA患者血漿IL-3、IL-8水平的變化，探討免疫調(diào)節(jié)因素在AA發(fā)病中的作用。
　　方法：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) AA患者白細(xì)胞上 CD55、CD59的表達(dá)；飽和酚抽提法提取基因組DNA，PCR擴(kuò)增AA患者

2、PIG-A基因外顯子（exon）2，exon4，exon5，過柱法純化PCR產(chǎn)物，并將純化的PCR產(chǎn)物送檢測(cè)序；定量酶免疫法測(cè)定對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組血漿中IL-3、IL-8的水平。
　　結(jié)果：①30例AA患者中有14例患者發(fā)生了PIG-A基因的突變，共發(fā)現(xiàn)43個(gè)突變位點(diǎn)，其中11例患者基因突變主要發(fā)生在exon2上，exon4及exon5上出現(xiàn)突變的患者各有5例。②AA患者PIG-A基因突變類型主要是單堿基的替代，43個(gè)突變位點(diǎn)中，除堿

3、基插入、堿基缺失各2個(gè)外，其余均為堿基替代，占總突變的90.70％。其中腺嘌呤（A）與鳥嘌呤（G）之間的堿基替代發(fā)生頻率最高，達(dá)23.26%；胞嘧啶（C）與 G之間的堿基替代發(fā)生頻率最低，僅為2.33%。C與胸腺嘧啶（T）之間堿基替代有87.5%為錯(cuò)義突變；C與G之間的堿基替代為同義突變。43個(gè)突變位點(diǎn)共引起28個(gè)氨基酸的改變。③AA患者白細(xì)胞CD55表達(dá)率（89.56%±9.23%）與正常對(duì)照（97.68%±1.52%）相比顯著性降低

4、（P﹤0.05）。AA患者 CD59的表達(dá)率（90.44%±11.75%）與正常對(duì)照（97.77%±1.59%）相比無顯著性差異（P﹥0.05）。④AA患者血漿中IL-3（28.33 ug/ml±8.34 ug/ml）水平與正常對(duì)照組（32.39 ug/ml±7.15 ug/ml）相比無明顯差異(P﹥0.05)。AA患者血漿IL-8（40.63 ug/ml±27.10 ug/ml）水平與正常對(duì)照（23.25 ug/ml±5.67 ug/

5、ml）相比明顯升高，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）。無PIG-A基因突變組血漿IL-8（60.02 ug/ml±22.94 ug/ml）水平明顯高于PIG-A基因突變組（19.07 ug/ml±6.77 ug/ml）（P﹤0.01）。
　　結(jié)論：①30例AA患者中有14例發(fā)生PIG-A基因的突變（突變率為46.67％），提示PIG-A基因的突變與AA的發(fā)病有一定聯(lián)系。②AA患者PIG-A基因突變位點(diǎn)主要集中于exon2上。突變