2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
 ?。?)觀察FFAR1是否參與PIO拮抗β細(xì)胞脂毒性凋亡的作用;
 ?。?)探討FFAR1介導(dǎo)PIO拮抗β細(xì)胞脂毒性凋亡與氧化應(yīng)激的關(guān)系;
  (3)研究FFAR1發(fā)揮介導(dǎo)效應(yīng)是否通過(guò)PLCγ-ERK1/2-PPARγ信號(hào)通路。
  方法:
  (1)以對(duì)葡萄糖敏感的小鼠胰島β細(xì)胞系(βTC6)作為研究對(duì)象,應(yīng)用RNAi慢病毒載體(siRNA)或FFAR1過(guò)表達(dá)慢病毒載體(FFAR1+)轉(zhuǎn)染βTC

2、6細(xì)胞以調(diào)控FFAR1基因表達(dá);1.0 mmol/L棕櫚酸(PA)干預(yù)β細(xì)胞24小時(shí),建立脂毒性β細(xì)胞模型,不同濃度PIO干預(yù)β細(xì)胞不同時(shí)間段;以觀察FFAR1對(duì)PIO拮抗β細(xì)胞脂毒性凋亡的影響。
  (2)PIO干預(yù)無(wú)轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)染慢病毒(siRNA或FFAR1+)的脂毒性β細(xì)胞;同時(shí)設(shè)置H2O2誘導(dǎo)的β細(xì)胞損害作為氧化應(yīng)激的陽(yáng)性對(duì)照;分析FFAR1介導(dǎo)PIO保護(hù)作用與氧化應(yīng)激的關(guān)系。
 ?。?)調(diào)控FFAR1的表達(dá)或運(yùn)用阻滯

3、劑抑制信號(hào)蛋白活性,并以FFAR1的特異激動(dòng)劑 TAK-875干預(yù)脂毒性β細(xì)胞作為對(duì)照,觀察 FFAR1發(fā)揮效應(yīng)與 PLCγ-ERK1/2-PPARγ信號(hào)級(jí)聯(lián)的關(guān)系。
  (4)技術(shù)手段:流式細(xì)胞術(shù)和TUNEL檢測(cè)β細(xì)胞的凋亡;RT-PCR檢測(cè)FFAR1基因的表達(dá);Western blot檢測(cè)FFAR1,氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白(NAPDH氧化酶亞基p47phox,bcl-2,Bax,cleaved caspase3)和信號(hào)因子(PLCγ

4、,ERK1/2,PPARγ)的表達(dá);DCFH-DA探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧含量,ELISA檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)IP3水平。
  結(jié)果:
 ?。?)PIO可呈濃度和時(shí)間依賴性改善脂毒性導(dǎo)致的β細(xì)胞凋亡和FFAR1表達(dá)抑制;沉默F(xiàn)FAR1表達(dá)可減弱PIO改善脂毒性導(dǎo)致的β細(xì)胞凋亡,而誘導(dǎo)FFAR1表達(dá),則可增強(qiáng)PIO抗β細(xì)胞凋亡的作用;FFAR1表達(dá)水平與β細(xì)胞凋亡呈負(fù)相關(guān)。
  (2)沉默F(xiàn)FAR1表達(dá)可減弱 PIO對(duì)脂毒性誘導(dǎo)的NA

5、PDH氧化酶亞基p47phox, Bax,cleaved caspase3表達(dá)和ROS產(chǎn)生的抑制以及對(duì)bcl-2表達(dá)的上調(diào)作用;而誘導(dǎo)FFA1R高表達(dá)則可增強(qiáng)PIO上述拮抗氧化應(yīng)激的作用。同樣,這種效應(yīng)也發(fā)生在H2 O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激上。
 ?。?)PIO或TAK-875均可上調(diào)脂毒性導(dǎo)致的PLCγ,ERK1/2,PPARγ表達(dá)抑制和細(xì)胞內(nèi)IP3水平的下降;而沉默F(xiàn)FAR1表達(dá)可削弱PIO上調(diào)上述蛋白表達(dá)的作用;誘導(dǎo)FFAR1過(guò)表

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