胰島素對糖尿病視網(wǎng)膜病變的影響及其機制研究.pdf

1、糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是糖尿病的嚴重并發(fā)癥之一，在發(fā)達國家DR致盲已經(jīng)位居致盲性眼病的前列。在我國，隨著經(jīng)濟的發(fā)展和生活水平的提高，DR的患病率正迅速升高。DR的防治已成為我國現(xiàn)階段眼科醫(yī)生和流行病專家共同的重要任務。 高血糖是引起DR的主要因素。血糖的控制對于DR及其原發(fā)病糖尿病的治療都是重中之重。胰島素是最常用的控制血糖的藥物，臨床上發(fā)現(xiàn)胰島素在控制全身血糖的同時，其加強治療導致1型和2型糖尿病患者視網(wǎng)膜病變的短暫惡化。流

2、行病學上，胰島素治療已成為DR進展的獨立危險因素。其中的機制不明。最新研究報道胰島素誘導患者網(wǎng)膜血管內皮生長因子(VEGF)表達升高導致血視網(wǎng)膜屏障破壞從而參與糖尿病視網(wǎng)膜病變的進程。 本研究為了了解胰島素在正常糖和高糖環(huán)境下對視網(wǎng)膜VEGF表達的影響及其機制，聯(lián)合進行體外和體內研究，體外研究通過體外培養(yǎng)的牛視網(wǎng)膜微血管內皮細胞(BREC)，探索正常糖(5mM)和高糖(30mM)環(huán)境下胰島素對BREC生長的影響，活性氧產(chǎn)生、凋亡

3、的影響；VEGFmRNA和蛋白表達的影響及其信號機制；體內研究采用鏈尿佐菌素(STZ)誘導的糖尿病SD大鼠，探索胰島素作用于正常檸檬酸緩沖液對照SD大鼠和STZ誘導的糖尿病SD大鼠后VEGFmRNA和蛋白表達的影響。VEGFmRNA通過Realtime-PCR檢測；VEGF蛋白通過免疫組化、Westernblot、HUVEC增殖實驗等方法檢測；ROS通過特異性熒光燃料H2DCFDA聯(lián)合激光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀觀察；細胞凋亡則通過熒光

4、燃料AnnexinV和PI聯(lián)合流式細胞儀觀察。 結果表明：在正常糖濃度下，胰島素在體內和體外均顯著上調VEGFmRNA和蛋白的水平。然而在高糖濃度下，胰島素在體內和體外都并不能顯著上調VEGFmRNA和蛋白的水平。高糖下胰島素主要通過PI-3K信號通路誘導VEGF的表達。在體外，胰島素在正常糖和高糖下均能顯著提高BREC活性氧的產(chǎn)生，并且胰島素聯(lián)合高糖作用后產(chǎn)生ROS顯著高于胰島素或高糖的單獨作用。胰島素在正常糖和高糖濃度下都能