RT-A體外穩(wěn)定性及其代謝物的蛋白結(jié)合率研究.pdf

1、RT-A及其代謝物RT-B為白藜蘆醇及其苷(包括虎杖苷)的氧代酸類衍生物,是以天然產(chǎn)物白藜蘆醇及其苷(虎杖苷)中的活性成分為母體化合物,進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾,設(shè)計(jì)出的對(duì)改善心血管功能具有高活性的化合物,為正在研究與開(kāi)發(fā)中的一類候選新藥。按照國(guó)家一類新藥臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究的有關(guān)要求,本文考察了RT-A的體外穩(wěn)定性,建立了測(cè)定血漿樣品中RT-B的定量分析方法,并成功的應(yīng)用此方法測(cè)定了RT-B與大鼠血漿蛋白的結(jié)合率。通過(guò)這些基礎(chǔ)試驗(yàn)研究,為該藥物的

2、臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　 本文采用高效液相色譜法系統(tǒng)地考察了溫度和pH對(duì)RT-A穩(wěn)定性的影響及其在大鼠血漿中的穩(wěn)定性。建立了測(cè)定緩沖溶液中RT-A的HPLC法,采用Kromasil C18色譜柱,以甲醇-0.1％乙酸(70:30,v/v)為流動(dòng)相,流速1.0 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)318 nm,柱溫40℃。其線性范圍為1-80μg/mL(r=0.9983),日內(nèi)和日間精密度(RSD)均小于11％,準(zhǔn)確度(RE)均在6.1％之間。

3、測(cè)定血漿中RT-A的HPLC法的色譜條件同上,其線性范圍為1.40μg/mL(r=0.9975),日內(nèi)和日間精密度(RSD)均小于9.8％,準(zhǔn)確度(RE)均在12.5％之間。結(jié)果表明,RT-A的穩(wěn)定性具有pH和溫度依賴性。在pH1.5～pH7.2的緩沖溶液中,RT-A可以穩(wěn)定存在,在緩沖溶液(pH9.5和pH11.0)中的濃度隨著時(shí)間延長(zhǎng)而下降,其降解符合偽一級(jí)動(dòng)力學(xué),RT-A的降解半衰期分別為3.76和0.30 h,且RT-A在pH1

4、1.0的磷酸鹽緩沖液中孵化后檢測(cè)到大量的RT-B。隨著溫度的升高,RT-A的穩(wěn)定性降低,在0,25,34和50℃條件下的半衰期分別為50.2,8.60,5.37和1.54 h。在血漿中RT-A也極不穩(wěn)定,通過(guò)加入酯酶抑制劑NaF增強(qiáng)了其在血漿中的穩(wěn)定性。
　　 本文首次建立了測(cè)定血漿樣品中RT-B的HPLC法。采用Kromasil C18色譜柱,以乙腈-0.2％磷酸水溶液(28:72,v/v)為流動(dòng)相,流速1.0 mL/min,

5、檢測(cè)波長(zhǎng)318 nm,柱溫40℃,其線性范圍為0.04-10μg/mL(r=0.9994),日內(nèi)和日間精密度(RSD)均小于15％,準(zhǔn)確度(RE)均在4.7％之間。本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好,為測(cè)定血漿樣品中RT-B提供了定量分析方法。
　　 本文采用平衡透析法考察了RT-B與大鼠血漿蛋白的結(jié)合率,為臨床上RT-B的血藥濃度監(jiān)測(cè)和應(yīng)用提供方法。配制低、中、高3個(gè)濃度的含藥透析液(1,2和3μg/mL),每個(gè)濃度3樣本分析,分別于