牛羊毛甾醇14α-脫甲基酶（CYP51）的cDNA克隆、基因結(jié)構(gòu)和表達(dá)的分析.pdf

1、MAS是膽固醇合成途徑中羊毛甾醇之后普遍存在的中間產(chǎn)物。在FSH誘導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起重要作用。羊毛甾醇14α-脫甲基酶(CYP51)將羊毛甾醇轉(zhuǎn)化為MAS。盡管MAS最早從牛睪丸中提取出來，但是關(guān)于牛的CYP51基因表達(dá)的研究仍不清楚。本文確定了牛CYP51的cDNA序列以及基因表達(dá)特點。牛CYP51cDNA包含1509bp的開放閱讀框，和1119bp的3'-非翻譯區(qū)，基因全長＞17kb，含有10個外顯子。啟動區(qū)無TAT

2、A-框，含有幾個序列高度保守的調(diào)節(jié)元件，如GC-box，cAMP反應(yīng)元件(cAMP-responsiveelements，CRE)，甾醇調(diào)節(jié)元件(sterolregulatoryelement，SRE)，這提示了哺乳動物上的CYP51轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)在進(jìn)化中的保守機(jī)制。長片段PCR和Southernblot實驗沒有發(fā)現(xiàn)CYP51假基因。Northernblot分析結(jié)果顯示，在牛全部組織上都有一個約2.7kb的長片段CYP51mRNA表達(dá)，僅僅在

3、成年牛睪丸上發(fā)現(xiàn)一個約1.8kb的短轉(zhuǎn)錄本，該轉(zhuǎn)錄本利用了上游的多聚腺苷酸位點加尾。免疫組化實驗中，使用兔抗人-CYP51抗體，發(fā)現(xiàn)在牛睪丸中，間質(zhì)細(xì)胞CYP51蛋白表達(dá)最強(qiáng)。在牛卵巢中，CYP51蛋白首先出現(xiàn)在卵母細(xì)胞上，在原始卵泡和初級卵泡上染色較深，隨卵泡增大顏色變淺。各級卵泡的顆粒細(xì)胞上CYP51蛋白呈現(xiàn)背景水平的染色，但是在格拉夫卵泡上，朝向卵泡腔的粒層細(xì)胞和卵丘細(xì)胞上CYP51蛋白的染色很深。CYP51蛋白在黃體上的表達(dá)量最