18931.用自裂解sumoulp1系統(tǒng)表達(dá)和純化犬重組干擾素_第1頁
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文檔簡介

1、用白裂解SUMO／ULP1系統(tǒng)表達(dá)和純化犬重組干擾素ExpressionandPurificationofRecombinantCanineInterferonaUsingSelfCleavingSUMO／ULPlSystem研究生：陳宇學(xué)科：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：孫懷昌教授揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院2012年5月?lián)P州人學(xué)碩一lj學(xué)位論文ExpressionandPurificationofRecombinantCanineInterferonaU

2、singSelfCleavingAbstractSUMO／ULP1System2一SUMOconsistsofabout100aminoacids，ahighlyconservedpeptidefamilyfoundineukaryotesAsafusiontag，SUMOcanincreaseexpressionlevelandsolubilityofforeignproteinsTheSUMOtagcanbecleavedfromt

3、hefusionproteinbySUMOproteaseULP1Elastin—likepolypeptide(ELP)isaclassofsyntheticmoleculeswithVPGXGrepeatswithtemperatureinducedreversibletransitionpropertyTherefore，theexpressionsystembasedonELPandSUMO／ULP1Canbeusedtoexp

4、ressandpurifyrecombinantproteinsToverytheusabilityoftheselfcleavingSUMO／ULP1systemforexpressionandpurificationofrecombinantproteins，thecodingsequencesforSUMOandULP1wereamplifiedfromyeastgenomebyPeRandsubmittedtosequencea

5、nalysisTheSUMOandULP1sequenceswereinsertedintoprokaryoticexpressionvectorcontainingELPsequence，resultinginfusionexpressionvectorspELPSUMOandpETELPULP1ThecodingsequenceforcanineimerferonQwasamplifiedbyPCRandsubclonedintop

6、ELP—SUMOvectorresultinginfusionexpressionvectorpETELPSUMOCaIFNAfterIPTGinductionatlowtemperature，SDSPAGEdetectedanexpected74kDaproteinbandinthelysateofpETELPSUMOCalFNtransformedEcoli，withayieldofabout1518mg／LByusingthete

7、mperature—inducedtransitionpropertyofELPthefusionproteinwaspurifiedafterrepeatedcentrifugationatdifferenttemperaturesByCO—incubationoffusionproteinELPSUMOCaIFNwithfusionproteinELPULP1，recombinantcanineinterferonQWassucce

8、ssfullyreleasedThesedataindicatethecorrectnessofclonedSUMOandULP1sequencesandtheestablishedexpressionsystemCanbeusedtoexpressandpurifyrecombinantproteinsKeywords：SUMO；ULP1；cloning；Fusionexpressionvectorrecombinantcaninei

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