兩株鴨疫里默氏菌免疫原和ideR基因差異研究.pdf

1、研究背景：鴨疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer，RA）屬黃桿菌科（Flavobacteriaceae）里默氏桿菌屬（Riemerella），為革蘭氏陰性短桿菌，有莢膜、無(wú)芽孢、無(wú)鞭毛，可引起鴨、鵝、火雞及其它多種鳥類發(fā)生感染。主要感染8周齡以內(nèi)的家鴨，引起鴨傳染性漿膜炎，具有高發(fā)病率、高死亡率的特點(diǎn)。產(chǎn)生以心周炎、肝周炎以及氣囊炎為主的病理變化。血清型多達(dá)21種，相互間缺乏有效的交叉免疫保護(hù)。不同血清型或即使同

2、一血清型的不同菌株之間也可能存在較大的毒力變化。一旦鴨群感染此菌，便迅速流行，且很難根除。然而，除已被證實(shí)的毒力相關(guān)蛋白外膜蛋白 A（outer membrane protein A, OmpA）、協(xié)同溶血素（cohemolysin protein, CAMP）、載鐵體蛋白（siderophone protein, SIP）和TonB-依賴性受體1（TonB-dependent receptor1, TbdR1）外，關(guān)于RA致病的分子機(jī)

3、制還知之甚少。
　　本課題組前期從成都某養(yǎng)鴨場(chǎng)分離得到一株RA血清1型SC株，并與在重慶某鴨場(chǎng)分離的RA血清2型AF株進(jìn)行了比較，研究發(fā)現(xiàn)：SC株RA能引起成年產(chǎn)蛋鴨發(fā)病甚至死亡而AF株不能，SC株感染鴨的發(fā)病率和死亡率均顯著高于AF株感染鴨的發(fā)病率和死亡率。目前GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中已經(jīng)提交了9株 RA全基因組序列，其中包括 ATCC11845、RA-CH-1、RA-CH-2、DSM15868、RA-GD、RA-SG、CH3、1

4、7、153，這些數(shù)據(jù)對(duì)深入研究該致病菌的致病機(jī)制與免疫保護(hù)性抗原有很大的幫助。
　　研究?jī)?nèi)容和結(jié)果：
　　1、SC ideR與AF ideR基因存在差異
　　根據(jù) RA SC和 AF全基因組序列，設(shè)計(jì)一對(duì)鐵吸收調(diào)節(jié)子基因（IRON-dependent repressor and activator，ideR）引物，采用PCR擴(kuò)增目的基因，經(jīng)鑒定正確的產(chǎn)物克隆至pMD18-T載體，序列分析發(fā)現(xiàn)，兩株菌的ideR基因的開(kāi)放

5、閱讀框均為654 bp，編碼217個(gè)氨基酸殘基。兩株菌的ideR基因的編碼區(qū)存在41處堿基差異，其中6個(gè)堿基差異引起了4個(gè)氨基酸殘基改變，導(dǎo)致蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。通過(guò)GenBank分析，AF株ideR序列與其登載的所有RA菌株完全相同，而SC株成為一個(gè)獨(dú)立的分支。
　　2、SC株與AF株RA菌體蛋白ELISA抗體存在差異
　　SC株和AF株RA菌體超聲破碎抗原間接ELISA能檢測(cè)到同源菌株人工感染耐過(guò)鴨血清中的抗 RA特異

6、抗體。采取同源菌體吸附去除凝集抗體后，ELISA抗體效價(jià)下降1~3個(gè)滴度，而異源菌的菌體吸附后則抗體效價(jià)未發(fā)生變化。結(jié)果顯示，SC株感染耐過(guò)鴨血清中ELISA抗體陽(yáng)性率低，僅為42.9％，效價(jià)也較低，為1:2000~8000，而AF株感染耐過(guò)鴨血清中ELISA抗體陽(yáng)性率高，達(dá)到83.3%且效價(jià)很高，一般為1:4000~16000。
　　3 SC株與AF株 RA菌體蛋白差異
　　SC株和AF株菌體超聲破碎上清，在SDS-PAG