11996.人降鈣素原基因的克隆表達(dá)及應(yīng)用

1、分類號(hào)：UDC：密級(jí)：壘玨編號(hào)：——人降鈣素原基因的克隆表達(dá)及應(yīng)用Cloning&ExpressionandApplicationofHumanProcalcitoninGene學(xué)位授予單位及代碼：籃壹堡王態(tài)堂(!Q!墾魚2學(xué)科專業(yè)名稱及代碼：玉扭絲堂(QZQ圣Q12研究方向：玉扭生塑納苤撾料申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：亟主指導(dǎo)教師：王暹堡熬援研究生：壑雪論文起止時(shí)間：201207—201312摘要降鈣素原是人體一種糖基化蛋白質(zhì)，因其特異性好、靈敏性

2、高而成為臨床檢測(cè)細(xì)菌感染、膿毒癥和敗血癥等疾病的一項(xiàng)重要指標(biāo)。本文采用昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)及大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)分別重組表達(dá)人降鈣素原(PCT)。人工合成降鈣素原基因，與轉(zhuǎn)移載體pFastBacTMl連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒pFBl一PCT并雙酶切鑒定；將pFBlPCT質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至DHl0Bac感受中進(jìn)行同源重組，得到重組桿狀病毒載體BaemidPCT，抽提質(zhì)粒并進(jìn)行PCR鑒定。用脂質(zhì)體法將BacmidPCT轉(zhuǎn)染si9細(xì)胞，擴(kuò)增病毒并感染sf9細(xì)胞

3、表達(dá)PCT，采用Westernblot進(jìn)行鑒定。將人工合成降鈣素原基因與PET22b表達(dá)載體連接，轉(zhuǎn)化至表達(dá)宿主菌BL21(DE3)中，優(yōu)化重組降鈣素原表達(dá)條件，使用鎳離子親和層析柱純化目的蛋白，采用ELISA方法鑒定重組降鈣素原的免疫原性。實(shí)驗(yàn)表明成功制備重組桿狀病毒載體BacmidPCT，Westernblot表明重組PCT與抗小鼠PCT單抗能特異性結(jié)合；利用昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在si9細(xì)胞中重組表達(dá)人降鈣素原，且具有免疫原性。利用