15800.東北野豬成纖維細(xì)胞冷應(yīng)激應(yīng)答分子機制研究

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號：B13130學(xué)位論文東北野豬成纖維細(xì)胞冷應(yīng)激應(yīng)答分子機制研究指導(dǎo)教師姓名：申請學(xué)位級別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：李忠秋馬建章院士博士2813年10月東北林業(yè)大學(xué)東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：野生動植物保護(hù)與利用論文答辯日期：2013年12月授予學(xué)位日期：答辯委員會主席：論文評閱人：圣：『厶彤素大學(xué)摘要摘要野豬是“受國家保護(hù)的有益的或者有重要經(jīng)濟、科學(xué)研究價值的陸生野生動物之一”。東北野豬屬亞洲野豬東北亞種，主要分布

2、在大興安嶺、小興安嶺、張廣才嶺、老爺嶺、完達(dá)山、長白山，遼寧的東部橫仁、寬甸等地，該區(qū)域冬季漫長、寒冷，最低氣溫可達(dá)一404。C。相對于家豬而言，東北野豬具有抗逆性高、抗病性強、食性廣泛、對于自然界惡劣氣候尤其是寒冷環(huán)境具有極強的耐受能力。目前國內(nèi)外關(guān)于低溫環(huán)境對野生動物影響的研究鮮有報道，更多是集中在對模式生物以及畜禽上的研究。研究內(nèi)容大都集中于血液生化指標(biāo)、激素和外周血液淋巴細(xì)胞熱休克蛋白70(heatshockprotein70，

3、HSP70)的表達(dá)變化等方面，而在細(xì)胞水平上進(jìn)行相關(guān)分子機制的研究報道并不多。細(xì)胞分子水平的變化是機體各種生理反應(yīng)的基礎(chǔ)，對細(xì)胞冷應(yīng)激相關(guān)基因的研究有助于深入理解冷應(yīng)激對機體影響的生物學(xué)機制。野豬是家豬的祖先，遺傳基礎(chǔ)與家豬相似，但未受到人工選擇，其現(xiàn)有性狀表型均是受自然選擇的結(jié)果，因此，以野豬為實驗材料，在細(xì)胞水平上研究低溫環(huán)境對其機體影響的分子機制將更接近真實、客觀的作用機理。本項目的研究結(jié)果將為今后更好的保護(hù)與利用野豬資源提供理論

4、幫助。本研究首先構(gòu)建東北野豬成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系，對細(xì)胞進(jìn)行冷應(yīng)激處理，對重要的冷應(yīng)激蛋白冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白進(jìn)行克隆和分析，在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)、RTPCR和real—timePCR等實驗技術(shù)，進(jìn)一步研究冷應(yīng)激對細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及冷應(yīng)激相關(guān)基因表達(dá)的影響及作用機理。從細(xì)胞分子水平研究東北野豬的抗寒冷機制，為研究冷應(yīng)激分子機制建立科學(xué)的細(xì)胞模型提供理論參考，為體外培養(yǎng)細(xì)胞作為試驗材料用于揭示機體冷應(yīng)激分子機制提供了有力佐證，為利用

5、東北野豬在改良家豬抗寒冷應(yīng)激分子育種提供理論支持。主要研究結(jié)果如下：1東北野豬成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立及生物學(xué)特性研究(1)組織塊在貼壁時間為4h，胰酶消化3min，傳代細(xì)胞貼壁時間為6h條件下，經(jīng)2次傳代便可得到純化的成纖維細(xì)胞，成功建立簡單易行的東北野豬成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系。(2)建立的東北野豬成纖維細(xì)胞系活率高、細(xì)胞生長迅速、細(xì)胞形態(tài)良好、無微生物污染。2冷誘導(dǎo)RN^結(jié)合蛋白基因克隆與序列分析從32。C處理的東北野豬成纖維細(xì)胞中提取