狂犬病野毒8202株核蛋白基因克隆和序列比較分析.pdf

1、該實驗以測定狂犬病野毒株(8202株)的N基因序列為主要研究內(nèi)容,目的在于研究8202株的分子生物學(xué)特性,探討其基因型與現(xiàn)用疫苗株N基因的差異和關(guān)系,為有效地使用疫苗提供科學(xué)依據(jù).同時,也旨在為篩選弱毒株、疫苗株、研制基因工程疫苗和基因疫苗、診斷試劑及全基因序列的測定提供有關(guān)數(shù)據(jù).該研究應(yīng)用現(xiàn)在廣泛使用的RT、半嵌套式PCR技術(shù),設(shè)計了三個引物即一對外引物和一個內(nèi)引物,對狂犬病野毒8202株核蛋白基因進行擴增,第一輪僅擴增出一條約750

2、bp的片段,但目的片段"尚未出現(xiàn)";第二輪擴增出了多條片段,其中包括目的片段,而后將目的片段與T載體相連并轉(zhuǎn)化DH<,5α>,獲得了重組菌.應(yīng)用DNAsis v2.5 Demo軟件將目的片段的測序結(jié)果與幾株狂犬病病毒株3aG、PV、CVS、HEP-Flury、RC-HL、Nishigahara、SADB19進行比較分析,結(jié)果表明8202株與3aG的核苷酸和氨基酸的同源性最高,分別為93.9﹪和94.6﹪,兩者均屬于同一個基因型,為基因Ⅰ