用組織工程方法構(gòu)建SD大鼠全層皮膚的研究.pdf

1、近年來(lái),隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展,研制人工皮膚替代物的研究報(bào)道逐漸增多.組織工程是目前生命科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn),相關(guān)的研究涉及到各個(gè)方面.其核心是應(yīng)用工程學(xué)的原理和方法與生命科學(xué)相結(jié)合,發(fā)展能恢復(fù)、保持或改善功能的生物替代品.該實(shí)驗(yàn)運(yùn)用組織工程學(xué)原理,成功在體外構(gòu)建了SD大鼠全層皮膚,實(shí)驗(yàn)主要包括以下內(nèi)容：1.從SD仔鼠皮膚同時(shí)獲取角朊細(xì)胞和真皮成纖維細(xì)胞的多種方法的比較：為了簡(jiǎn)便快捷的獲得大量最佳生長(zhǎng)狀態(tài)的角朊細(xì)胞和真皮成纖維細(xì)胞以作為皮

2、膚組織工程的種子細(xì)胞.2.角朊細(xì)胞在三種不同培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀態(tài)：配制FAD、MCDB153（-）、MCDB153（+）三種不同的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)SD大鼠的角朊細(xì)胞,通過(guò)細(xì)胞曲線、MTT檢測(cè)、流式細(xì)胞儀分析觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài).結(jié)果顯示細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好,而加入表皮生長(zhǎng)因子和促進(jìn)增殖的垂體提取物可以進(jìn)一步改善細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài).3.EGF對(duì)真皮成纖維細(xì)胞中cyclinD1和CDK-4表達(dá)的影響：用含100mL·L<'-1>胎牛血清的DME

3、M,加入50mg·L<'-1>的EGF培養(yǎng)SD大鼠的真皮成纖維細(xì)胞,通過(guò)MTT檢測(cè)、流式細(xì)胞儀分析觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),免疫組化檢測(cè)cyclinD1和CDK-4的表達(dá),結(jié)合流式細(xì)胞儀分析來(lái)觀察細(xì)胞的周期變化.4.三維立體培養(yǎng)中不同濃度的膠原對(duì)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：分離1-2天SD仔鼠背部皮膚的成纖維細(xì)胞,分別種了6.4mg/ml,5.3mg/ml,4mg/ml的膠原中,光鏡觀察立體培養(yǎng)條件下成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和細(xì)胞數(shù)量,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析.

4、結(jié)果顯示6.4mg/ml的膠原濃度最適宜于成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng).5SD大鼠全層組織工程皮膚的制備：分離SD仔鼠角朊細(xì)胞和成纖維細(xì)胞.6.bFGF和FN在同種異體組織工程皮膚促進(jìn)大鼠皮膚缺損愈合中的表達(dá)：以新生SD大鼠皮膚的角朊細(xì)胞和真皮成纖維細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚并將其移植到成年Wistar大鼠,通過(guò)HE染色、免疫組織化學(xué)方法對(duì)移植后不同時(shí)間的組織工程皮膚進(jìn)行檢測(cè),觀察創(chuàng)面愈合過(guò)程中bFGF、FN的表達(dá)變化及其與組織修復(fù)的關(guān)系.結(jié)果顯示bFG