蛋白質(zhì)-多糖復(fù)合納米纖維膜用于構(gòu)建組織工程全層皮膚的實驗研究.pdf

1、第一部分蛋白質(zhì)/多糖和蛋白質(zhì)—多糖/P(LLA—CL)復(fù)合納米纖維膜用于皮膚缺損修復(fù)的實驗研究
　　 目的：通過動物實驗的方法評價絲素蛋白/殼聚糖(兩者比例為80：20)、絲素蛋白/殼聚糖(兩者比例為50：50)、絲素蛋白—殼聚糖/P(LLA—CL)(兩者比例為25：75)、膠原蛋白/殼聚糖(兩者比例為80：20)、明膠/透明質(zhì)酸(兩者比例為90：10)復(fù)合納米纖維膜對于SD大鼠背部全層皮膚缺損創(chuàng)面修復(fù)的作用。
　　 方

2、法：將上述五種復(fù)合納米纖維膜材料分成五組，并將其分成兩部分完成，第一部分一、二、三組，第二部分四、五、六組進行實驗，實驗組用相應(yīng)的復(fù)合納米纖維膜覆蓋在雌性SD大鼠皮膚缺損創(chuàng)面，外被油紗和紗布敷料；每組各用大鼠15只；對照組僅覆蓋油紗和紗布敷料，用大鼠15只。實驗組和對照組大鼠背部皮膚缺損的面積均為2×1．5cm2；第一部分于術(shù)后第3、7、21天，第二部分于術(shù)后第3、7、14天，每組各隨機取5只SD大鼠處死，觀察SD大鼠大體情況、創(chuàng)面情況

3、，并取創(chuàng)緣與正常創(chuàng)面組織4％甲醛固定，行石蠟包埋切片H—E染色光鏡下對比觀察。
　　 結(jié)果：與對照組相比，實驗組創(chuàng)面修復(fù)情況較對照組好，其中尤以絲素蛋白/殼聚糖(80：20)、絲素蛋白—殼聚糖/P(LLA—CL)(25：75)和膠原蛋白．殼聚糖(80：20)復(fù)合生物材料的促創(chuàng)傷修復(fù)作用更明顯。
　　 結(jié)論：絲素蛋白/殼聚糖(80：20)、絲素蛋白—殼聚糖/P(LLA—CL)(25：75)和膠原蛋白—殼聚糖(80：20)復(fù)

4、合納米纖維膜較普通生物敷料和其他兩組生物材料能更好的促進創(chuàng)傷修復(fù)、愈合，有著較好的科研和臨床應(yīng)用前景。
　　 第二部分蛋白質(zhì)—多糖復(fù)合納米纖維膜用于構(gòu)建組織工程全層皮膚的實驗研究
　　 基于生物可降解復(fù)合納米纖維材料而設(shè)計的共培養(yǎng)體系制作的組織工程皮膚已有報道。在體外，對細胞與膠原蛋白—殼聚糖復(fù)合納米纖維材料共培養(yǎng)后，并對納米生物材料進行觀察和性能評估的實驗也已有報道。我們現(xiàn)用這種共培養(yǎng)體系將SD大鼠皮膚角質(zhì)細胞和皮膚成

5、纖維細胞與膠原蛋白—殼聚糖(80：20)復(fù)合納米纖維材料共培養(yǎng)模擬全層皮膚結(jié)構(gòu)建立多層組織工程復(fù)合物。首先，分離培養(yǎng)SD大鼠皮膚角質(zhì)細胞和皮膚成纖維細胞，并在倒置顯微鏡下對細胞的形態(tài)進行觀察；其次，將培養(yǎng)至三至四代的SD大鼠皮膚細胞與復(fù)合生物材料共培養(yǎng)；培養(yǎng)一周后，通過掃描電鏡觀察生物材料以及細胞在材料上面的形態(tài)；通過MTT試驗評估細胞增殖與細胞在生物材料上面的增殖特性；用免疫細胞化學(xué)的方法評估細胞以及細胞在生物材料上的生長和形態(tài)。以合