蛛絲蛋白八聚體轉基因小鼠的制備及檢測.pdf

1、蛛絲蛋白是蜘蛛腹部絲腺中合成的一種結構特殊的纖維蛋白，因具有質量輕、韌性大、超收縮、抗張力強等優(yōu)良特性，具有廣泛的應用前景。蛛絲蛋白八聚體是由擬蜘蛛拖絲蛋白基因人工合成的核心序列S經翻譯后連接而成的八聚體。為了深入了解8S蛛絲蛋白基因對毛發(fā)性能的作用，本實驗采用原核顯微注射技術，制備蛛絲蛋白八聚體轉基因小鼠。通過PCR及Southern Blot檢測方法鑒定陽性鼠，并通過Real-time PCR，Western Blot、免疫熒光染色

2、等方法對轉基因陽性小鼠進行表達檢測。
　　1.蛛絲蛋白八聚體轉基因小鼠的制備與鑒定
　　蛛絲蛋白基因對毛發(fā)性能的改善有一定的作用。為了進一步探究蛛絲蛋白基因對毛發(fā)性能的具體作用及表達規(guī)律，我們通過原核注射方法制備蛛絲蛋白基因毛囊細胞特異性表達的小鼠。用PCR及Southern Blot鑒定陽性鼠，實驗共得到F0代小鼠67只，通過鑒定，我們得到陽性鼠3只，陽性率為4.47％。
　　本研究成功制備了蛛絲蛋白八聚體的轉基因小

3、鼠，為以后研究該基因的功能創(chuàng)造了實驗條件。
　　2.蛛絲蛋白八聚體轉基因小鼠表達水平的檢測
　　成功制備轉基因陽性鼠后，首先進行了mRNA水平的檢測。通過Real-timePCR檢測結果為:3只陽性鼠在mRNA水平都表達了目的基因，而對照鼠沒有目的基因的表達。然后以α-tubulin為內參基因，進行蛋白質水平的檢測，所用方法為Western Blot。檢測結果為:3只陽性鼠在蛋白質水平都有目的基因的表達，對照鼠沒有檢測到目的