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文檔簡介
1、在G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs,7TMRs)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中,經(jīng)典的理論認(rèn)為β—arrestins使激活的受體與G蛋白解偶聯(lián)(脫敏),阻斷了受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo),進(jìn)而導(dǎo)致受體內(nèi)吞。近來的研究發(fā)現(xiàn)β—arrestins不僅終止GPCRs的信號,還可以介導(dǎo)GPCRs的內(nèi)吞和運(yùn)輸,引發(fā)GPCRs的新信號,以及介導(dǎo)GPCRs和其它信號通路間的交流。為了更進(jìn)一步研究β-arrestins在活體水平上的功能定位,我們運(yùn)用轉(zhuǎn)基因技術(shù),通過體外構(gòu)建目的基因載體,原核期
2、胚胎的顯微注射,再進(jìn)行PCR和SouthernBlot鑒定,最終制備了humanβarrestinⅠoverexpressionmice,humanβarrestinⅡoverexpressionmice,mouseβarrestinⅠRNAimice和mouseβarrestinⅡRNAimice四種轉(zhuǎn)基因鼠。經(jīng)過實(shí)時(shí)熒光定量PCR鑒定純合小鼠。自此,系統(tǒng)便初步建立起來。然后,我們進(jìn)行RT-PCR和免疫組化試驗(yàn),進(jìn)行蛋白表達(dá)鑒定。阿片
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