蝗綠僵菌GTPase激活蛋白基因Gyp3的功能研究.pdf

1、綠僵菌是一類重要的昆蟲病原真菌，具有生防菌株的共有優(yōu)點(diǎn)；同時(shí)由于其宿主廣泛而成為研究昆蟲病原真菌的模式生物。綠僵菌在日常生產(chǎn)生活施用中也存在諸多制約因素，比如受環(huán)境影響大、殺蟲速度較慢等。因此對(duì)影響昆蟲病原真菌毒力和抗逆境能力的基因進(jìn)行研究并以此為突破口改良菌株，能為真菌農(nóng)藥的開發(fā)利用提供重要的理論基礎(chǔ)。
　　研究表明GYP3通過抑制Rab5家族蛋白活性從而降低GTP水解速率，在病原真菌中并沒有對(duì)該蛋白的研究報(bào)道。同時(shí)在病原真菌中

2、研究發(fā)現(xiàn)該類蛋白的靶蛋白R(shí)ab5家族對(duì)致病真菌的正常生長(zhǎng)，毒力和抗逆境能力都至關(guān)重要；有報(bào)道稱Rab5家族在壓力條件下發(fā)揮作用時(shí)需要Rab5GAP蛋白的參與，那么GYP3或許可以通過調(diào)控Rab5家族活性從而實(shí)現(xiàn)對(duì)菌株毒力和抗逆境能力等方面的影響，所以本研究為發(fā)現(xiàn)Gyp3基因在昆蟲病原真菌中的功能及作用機(jī)制提供了理論證據(jù)，同時(shí)這也有利于利用分子生物學(xué)與基因工程等手段實(shí)現(xiàn)對(duì)綠僵菌菌株的改良。
　　本文以綠僵菌作為實(shí)驗(yàn)材料，通過對(duì)該基因

3、敲除及回復(fù)明確該基因功能分析其作用機(jī)制。
　　主要研究結(jié)果如下：
　　1、Gyp3降低綠僵菌對(duì)Na+和對(duì)濕熱以及紫外輻射（UV-B）的耐受能力：在加入Nacl的1/4SDA固體培養(yǎng)基上，敲除轉(zhuǎn)化子菌落大小明顯小于野生型和回復(fù)轉(zhuǎn)化子；隨著UV-B和熱激時(shí)間的增加，ΔGyp3與WT和CP相比萌發(fā)率顯著降低。
　　2、Gyp3不調(diào)控綠僵菌產(chǎn)孢量，孢子附著胞形成率及對(duì)細(xì)胞壁破壞劑耐受性：在加入細(xì)胞壁破壞劑的1/4SDA固體培養(yǎng)

4、基上，敲除轉(zhuǎn)化子菌落大小與野生型和回復(fù)轉(zhuǎn)化子相比無明顯差異。通過測(cè)量統(tǒng)計(jì)，ΔGyp3的產(chǎn)孢量和孢子附著胞形成率與WT和CP相比降低無顯著差異。
　　3、Gyp3通過影響綠僵菌在東亞飛蝗體表的萌發(fā)率、膨壓及附著胞水解體壁水解酶的表達(dá)、在寄主昆蟲血淋巴中的生長(zhǎng)等過程調(diào)控其毒力：通過測(cè)量統(tǒng)計(jì)，ΔGyp3的萌發(fā)率、膨壓及附著胞水解體壁水解酶的表達(dá)與WT和CP相比顯著降低；抑制在寄主昆蟲血淋巴中的生長(zhǎng)。
　　4、Gyp3可以通過調(diào)控靶