番茄SlDP1基因的克隆及功能研究.pdf

1、細(xì)胞周期是一個精密的過程，受到多種物質(zhì)的調(diào)控，E2F/DP是其一個重要的功能復(fù)合體。DP是E2F的伴侶蛋白，使E2F異源二聚化，并協(xié)助其定位到細(xì)胞核，使基因轉(zhuǎn)錄或抑制。
　　植物E2F/DP家族基因轉(zhuǎn)錄的總體水平較低，但是該家族基因在某些特異的組織中表達(dá)豐沛，如增生器官和生長旺盛的組織等?；蛐酒治霭l(fā)現(xiàn)該家族可能還參與植物生命過程的營養(yǎng)調(diào)控。
　　本研究根據(jù)SNG數(shù)據(jù)庫獲得DNA序列信息克隆了番茄SlDP1基因，開放閱讀框

2、為906 bp，可編碼301個氨基酸。采用生物信息學(xué)的方法分析該基因及編碼蛋白的分子特征；通過熒光定量PCR研究該基因的表達(dá)模式；研究SlDP1基因?qū)に?、鹽脅迫及傷害的應(yīng)答特征；構(gòu)建了沉默載體并對番茄進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，檢測該基因在番茄葉片的沉默效果。本研究得到的主要結(jié)論如下：
　　①根據(jù)SNG數(shù)據(jù)庫登錄信息（SGN-U567182），設(shè)計引物克隆該基因的開放閱讀框和部分C-末端序列，大小為1094 bp，命名為SlDP1；
　

3、?、谏镄畔W(xué)分析，SlDP1基因定位于細(xì)胞核，具有保守的DNA結(jié)合域、二聚化區(qū)域和C-末端及多個磷酸化位點(diǎn)。二級結(jié)構(gòu)預(yù)測SlDP1蛋白含51.50％的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，34.55%的α螺旋和2.66%的β折疊。通過編碼蛋白序列比對，顯示該基因與葡萄等同源性高達(dá)70%~80%，同源區(qū)域主要集中在 DNA結(jié)合域、二聚化區(qū)域和C-末端部分區(qū)域；
　?、郾磉_(dá)模式分析發(fā)現(xiàn) SlDP1基因在野生型番茄根、花及萼片以及果實(shí)成熟時期B、B+4及B+7時

4、期表達(dá)量較高，并且在果實(shí)的發(fā)育成熟過程中其表達(dá)量有一個明顯的上升趨勢；
　?、芡庠醇に靥幚矸阎仓臧l(fā)現(xiàn)，ACC和IAA處理的植株SlDP1基因表達(dá)量提高；
　　⑤鹽處理的葉片 SlDP1基因表達(dá)量下降，傷害處理的葉片該基因表達(dá)量顯著下降；
　?、蕹晒?gòu)建了 pBIN19：SlDP1沉默載體，用接合轉(zhuǎn)移的方法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404，通過番茄外植體侵染，Kan篩選獲得轉(zhuǎn)基因番茄苗。NPTII檢測，將轉(zhuǎn)基因苗命名為1-5五