小鼠和家兔卵母細(xì)胞體外發(fā)生的培養(yǎng)體系與發(fā)育特征的研究.pdf

1、哺乳動(dòng)物卵巢卵母細(xì)胞發(fā)育的研究，最初主要關(guān)注生殖細(xì)胞形成的早期階段或出生后卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育。然而，至今為止，對(duì)原始卵泡的形成以及卵泡生長(zhǎng)的啟動(dòng)與選擇的調(diào)控機(jī)制還了解很少。雖然小鼠原始卵泡可以體外培養(yǎng)發(fā)育并可獲得成熟的卵母細(xì)胞，但減數(shù)分裂前的雌性生殖細(xì)胞不能在體外完成這一過程。鑒于此，本試驗(yàn)以家兔和小鼠為模型動(dòng)物，來篩選一種簡(jiǎn)便、易行的卵巢卵母細(xì)胞體外發(fā)生的培養(yǎng)體系，進(jìn)行卵母細(xì)胞的體外發(fā)生研究。
　　 本研究分析了在完全體外條件下，

2、小鼠卵巢卵母細(xì)胞的分化與發(fā)育能力。機(jī)械法分離12.5dpc胎鼠卵巢，并將胎鼠卵巢去除中腎組織后貼壁培養(yǎng)28d，分析小鼠卵母細(xì)胞體外發(fā)生與卵巢卵母細(xì)胞體內(nèi)正常發(fā)育之間的差異，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小鼠減數(shù)分裂前的雌性生殖細(xì)胞體外培養(yǎng)可發(fā)育成平均直徑為75μm左右的卵母細(xì)胞，培養(yǎng)2d后，卵巢組織開始貼壁，第10d，卵母細(xì)胞形態(tài)開始出現(xiàn)，第26d時(shí)，卵母細(xì)胞平均直徑增大到70μm以上，體外培養(yǎng)最后得到的卵母細(xì)胞平均直徑可以達(dá)到75μm，而體內(nèi)正常發(fā)育

3、的卵泡平均直徑能達(dá)到84.7μm，兩者差異顯著(P＜0.05)。另外，體外培養(yǎng)了22d的卵巢卵泡直徑可達(dá)到90μm以上，顆粒細(xì)胞1.6±0.2層，細(xì)胞數(shù)目為32±2.6個(gè)，與體內(nèi)發(fā)育的卵泡相比差異顯著(P＜0.05)，但體外發(fā)育的卵母細(xì)胞的特異基因表達(dá)與正常小鼠的沒有顯著差異。此外，體外培養(yǎng)的卵母細(xì)胞不能完成減數(shù)分裂，因?yàn)橹挥畜w內(nèi)發(fā)育成熟的卵母細(xì)胞有pERK1/2表達(dá)，而體外培養(yǎng)的卵母細(xì)胞不表達(dá)。
　　 本研究根據(jù)家兔卵巢卵母細(xì)

4、胞的體內(nèi)發(fā)育特征初步探討了家兔卵巢卵母細(xì)胞體外發(fā)育的培養(yǎng)體系。采集30日齡家兔卵巢在不同培養(yǎng)條件下長(zhǎng)期培養(yǎng)，分析家兔卵母細(xì)胞的體外發(fā)生與家兔卵巢卵母細(xì)胞體內(nèi)正常發(fā)育之間的差異，來優(yōu)化家兔卵巢卵母細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系。本試驗(yàn)從基礎(chǔ)培養(yǎng)液、FSH濃度、BSA/血清等方面來篩選較好的培養(yǎng)條件，結(jié)果表明:使用DMEM/F12+α-MEM為基礎(chǔ)培養(yǎng)液培養(yǎng)的卵巢的卵母細(xì)胞數(shù)最多(17.4±3.5個(gè)/卵巢)，直徑最大(63±3.2μm)，與其它組相比差

5、異顯著(P＜0.05);添加血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)的卵巢的卵母細(xì)胞數(shù)(16.7±2.9個(gè)/卵巢)與卵母細(xì)胞直徑(60.2±3.3μm)比添加BSA的培養(yǎng)液效果好，差異顯著(P＜0.05);家兔卵巢組織在FSH濃度為50mIU/ml的培養(yǎng)液中生長(zhǎng)較好，卵母細(xì)胞數(shù)量多(18.5±2.8個(gè)/卵巢)，直徑較大(65±2.3μm)，與其他組相比，差異顯著(P＜0.05)。新生兔卵巢組織在DMEM/F12+α-MEM和10％FCS培養(yǎng)液培養(yǎng)到28d時(shí)，卵