TLR4在雞小腸內(nèi)的分布規(guī)律研究.pdf

1、消化道不僅僅是消化器官，也是重要的免疫器官，在抵抗病原微生物的入侵過程中發(fā)揮十分重要作用。天然免疫是宿主對(duì)抗外來微生物感染的第一道防線，當(dāng)微生物入侵時(shí)，宿主通過病源模式識(shí)別受體(pattern-recognition receptors，PRRs)識(shí)別病原相關(guān)分子模式(pathogen associated molecular patterns，PAMs)并啟動(dòng)天然免疫，從而發(fā)揮防御作用。Toll樣受體(Toll-like recept

2、ors，TLRs)是天然免疫系統(tǒng)中一類模式識(shí)別受體，由胞外區(qū)、跨膜區(qū)、胞漿區(qū)三個(gè)部分組成。TLR4(Toll-like receptor4，TLR4)是人類發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)TLR相關(guān)蛋白，所有的細(xì)胞系幾乎均有分布，目前對(duì)它的研究受到越來越多的關(guān)注。但有關(guān)TLR4在雞腸道內(nèi)的分布規(guī)律以及TLR4與雞腸黏膜免疫的關(guān)系研究還較少。因此，本課題以1-6周齡科寶肉雞為研究對(duì)象，通過研究不同日齡雞腸道內(nèi)TLR4及神經(jīng).免疫.內(nèi)分泌相關(guān)細(xì)胞的變化規(guī)律以及

3、脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激對(duì)其的影響來探討它們與腸道黏膜免疫的關(guān)系，主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　 1、雞小腸內(nèi)TLR4的增齡性變化規(guī)律
　　 為研究免疫因子TLR4在不同日齡雞小腸內(nèi)的分布及變化規(guī)律，探討TLR4對(duì)雞小腸黏膜免疫作用的可能機(jī)制，本課題采用免疫組化SABC方法對(duì)雞小腸內(nèi)TLR4的分布及表達(dá)變化做出研究。結(jié)果顯示：不同日齡雞小腸內(nèi)均表達(dá)TLR4，且具有較為明顯的日齡依賴式規(guī)律，表現(xiàn)

4、為隨著日齡的增加，TLR4在小腸內(nèi)的表達(dá)逐漸增強(qiáng)，同一時(shí)期的小腸中，TLR4在十二指腸內(nèi)分布最多，空腸次之，回腸內(nèi)分布最少。TLR4主要在腸上皮、腸黏膜固有層表達(dá)，腸腺周圍的固有層內(nèi)TLR4陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)量較多，細(xì)胞多散在分布，也有少量集合成簇，形態(tài)多樣。這一研究結(jié)果提示我們，雞的腸道粘膜免疫是一個(gè)逐漸發(fā)育完善的過程，腸黏膜固有層為小腸發(fā)揮免疫功能的主要場(chǎng)所，且TLR4的增齡性表達(dá)可能與機(jī)體抵御微生物的感染所做出的防御性免疫反應(yīng)相關(guān)。

5、r>　　 2、LPS刺激對(duì)雞小腸內(nèi)TLR4表達(dá)的影響
　　 本實(shí)驗(yàn)采用LPS刺激模擬細(xì)菌感染后，研究TLR4在小腸內(nèi)的分布及表達(dá)變化，以探討TLR4在黏膜免疫中發(fā)揮作用的機(jī)制。研究結(jié)果顯示：LPS處理組較生理鹽水注射組小腸內(nèi)的TLR4表達(dá)強(qiáng)烈，其分布規(guī)律大致相同，主要分布于黏膜固有層，其中腸腺周圍及靠近上皮的固有層內(nèi)表達(dá)量較多，實(shí)驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)在腸上皮有較強(qiáng)的TLR4陽(yáng)性信號(hào)表達(dá)，進(jìn)一步驗(yàn)證了腸上皮、黏膜固有層以及腸腺是腸黏膜免

6、疫的主要場(chǎng)所，另外，也證實(shí)了外源性病原微生物入侵時(shí)，TLR4與腸黏膜固有層、腸腺及上皮處所介導(dǎo)的免疫反應(yīng)作用密切，在維持腸道正常生理功能上發(fā)揮著一定的作用。
　　 3、嗜銀細(xì)胞在雞小腸內(nèi)的分布規(guī)律
　　 本研究采用鍍銀染色法觀察雞小腸內(nèi)嗜銀細(xì)胞的分布及變化規(guī)律，探討神經(jīng)內(nèi)分泌與免疫的關(guān)系。研究結(jié)果顯示：嗜銀細(xì)胞在各日齡階段雞小腸內(nèi)均有表達(dá)，且隨著日齡的增加呈現(xiàn)“波浪式”的變化規(guī)律，即：1-3周齡的嗜銀細(xì)胞不斷增加，至4、

7、5周齡減少，6周齡又有一個(gè)顯著的增加趨勢(shì)，嗜銀細(xì)胞主要分布于腸黏膜固有層，多散在分布，也有一些分布較為集中，嗜銀細(xì)胞的形態(tài)各異，呈梭形的細(xì)胞多分布于靠近上皮的固有層內(nèi)，而圓形及不規(guī)則圓形的細(xì)胞則多集中于中央固有層及腸腺周圍固有層。較多的嗜銀細(xì)胞的分布位置及細(xì)胞形態(tài)與TLR4的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。這一結(jié)果提示我們，嗜銀細(xì)胞在腸道內(nèi)發(fā)揮著免疫細(xì)胞相類似的免疫保護(hù)作用，而發(fā)揮作用的機(jī)制有可能是通過神經(jīng)-免疫-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)及TLR4共同調(diào)節(jié)的。

8、　　 4、LPS刺激對(duì)雞小腸內(nèi)嗜銀細(xì)胞的影響
　　 為了探究嗜銀細(xì)胞與黏膜免疫的關(guān)聯(lián)作用，本實(shí)驗(yàn)通過鍍銀染色法來觀察注射LPS后雞小腸內(nèi)嗜銀細(xì)胞的變化規(guī)律，以進(jìn)一步探討嗜銀細(xì)胞與黏膜免疫的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，LPS處理組腸道內(nèi)嗜銀細(xì)胞較生理鹽水處理組顯著增多，主要還是分布在腸黏膜固有層，除了細(xì)胞數(shù)量有所增加外，細(xì)胞形態(tài)、分布位置等也都存在一些變化，如十二指腸中的梭形細(xì)胞數(shù)量增多，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的顆粒性物質(zhì)較多的指向腸腔，空腸及回腸中