玉米中三種真菌毒素檢測方法的研究.pdf

1、霉菌毒素能夠降低飼料的飼喂價值，影響畜禽的生產(chǎn)性能，對動物組織機能、健康產(chǎn)生不利影響，甚至導致畜禽死亡。黃曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、嘔吐毒素(DON)是被大眾廣泛研究的三種霉菌毒素，也是污染最為普遍的三種毒素。霉菌毒素可以不同的劑量對動物和人的健康造成不同程度的威脅。因此，對于霉菌毒素以及產(chǎn)毒霉菌的檢測顯得至關重要。目前常用的霉菌毒素檢測方法有薄層層析、液相色譜、免疫化學分析等幾種方法，主要基于霉菌毒素的理化性質(zhì)

2、，無法檢出已被產(chǎn)毒真菌污染但尚未產(chǎn)毒的高風險樣品。多重PCR檢測方法，可在單一泳道反應體系中同時檢測多個DNA模板或同一模板的不同區(qū)域，具有快捷、高效、低成本等優(yōu)點，被廣泛應用于有害微生物檢測。
　　本課題調(diào)研了我省2012年秋季玉米中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素的污染情況，對三類霉菌毒素與玉米籽粒水分含量、破損率、霉變率之間的相關性進行了分析。以產(chǎn)毒真菌黃曲霉、鐮刀菌的基因組DNA為模板，根據(jù)AFB1、ZEN、DON三

3、種毒素生物合成中關鍵基因的序列設計引物，構建了能夠從樣品中快速靈敏檢測潛藏性產(chǎn)毒真菌的多重PCR檢測體系。
　　1)課題從我省各地采集了87份玉米樣品，利用ELISA試劑盒對各樣品中黃曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、嘔吐毒素(DON)的含量進行檢測。結果表明，AFB1、ZEN、DON的檢出率分別為98.85％、100％、100％;ZEN超標率最高，達到12.64％，DON超標率次之，為6.90％，AFB1超標率最

4、低為3.45％;對三種毒素含量之間的相關性進行分析，結果發(fā)現(xiàn)ZEN與DON之間存在著極顯著的線性相關性(p=0.0008)，相關系數(shù)為0.1368。
　　2)根據(jù)國標GB13078-2001規(guī)定，對各個樣品的水分含量，采用統(tǒng)計方法對各個樣品籽粒破損率、霉變率進行檢測，所得各項數(shù)據(jù)與AFB1、ZEN、DON的含量進行相關性分析。結果表明，所有玉米樣品中自由水、結合水、總水含量最高值分別為14.06％、5.95％、19.24％，最低值

5、分別為4.79％、1.11％、9.46％，平均含量分別為9.44％、4.02％、13.46％;平均霉變率、殘破率分別為5.08％、6.08％，霉變率最嚴重的樣品達到27.20％，殘破率最嚴重的為31.80％;霉變率與ZEN含量呈極顯著相關性(P=0.0058)，與殘破率呈顯著相關性(P=0.0354)。
　　3)本課題分別根據(jù)AFB1、ZEN、DON生物合成中的調(diào)控基因aflR、PKS13、tri5的序列以及真菌共有的β-Tubu