齊口裂腹魚CB1和SPX基因克隆與組織表達(dá)以及營養(yǎng)狀態(tài)對(duì)其表達(dá)影響.pdf

1、本試驗(yàn)為研究齊口裂腹魚CB1和SPX對(duì)攝食調(diào)控的作用，主要通過RACE等技術(shù)獲得了CB1和SPX序列，以及利用熒光定量技術(shù)等檢測齊口裂腹魚CB1和SPX mRNA在組織中表達(dá)以及營養(yǎng)狀態(tài)（餐前餐后、禁食與復(fù)投喂）對(duì)其表達(dá)的影響。
　　結(jié)果顯示，通過分子克隆技術(shù)獲得了齊口裂腹魚的部分CB1序列和全長SPX序列，長度分別是1234 bp和1330 bp。序列分析發(fā)現(xiàn)，齊口裂腹魚CB1和SPX基因在魚類上高度保守。結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示，齊口裂腹

2、魚CB1跨膜結(jié)構(gòu)與斑馬魚在序列上的位置高度相似;SPX具有31個(gè)氨基酸組成的信號(hào)肽以及二元堿基剪切位點(diǎn)(RR and GRR)包含的14個(gè)氨基酸成熟肽。
　　CB1和SPX在組織中廣泛分布，并在前腦中表達(dá)量最高。CB1在垂體、心臟、皮膚等組織中表達(dá)也豐富，而在性腺中表達(dá)最低;SPX在垂體、前腸、中腸等組織中表達(dá)也較高，而在肌肉中幾乎不表達(dá)。
　　餐前餐后試驗(yàn)分別檢測了7個(gè)組齊口裂腹魚在-3 h，-1h，0h（投喂點(diǎn)），+1h

3、和+3 h共5個(gè)時(shí)間點(diǎn)齊口裂腹魚前腦中CB1和SPX的mRNA變化情況。結(jié)果表明，未進(jìn)食組的齊口裂腹魚前腦中CB1 mRNA在餐后后的+3h出現(xiàn)顯著升高(P＜0.01）。投喂組CB1 mRNA比饑餓組在+1h和+3h下降顯著(P＜0.01）;與之相反，未進(jìn)食組齊口裂腹魚SPX mRNA表達(dá)水平在餐后+1h和+3h顯著降低(P＜0.01)，與未進(jìn)食組比較，SPX表達(dá)在餐后顯著升高。
　　禁食試驗(yàn)持續(xù)9天共9個(gè)組，分別為5個(gè)禁食組和4

4、個(gè)正常投喂組，其中2個(gè)禁食組在第7天開始復(fù)投喂，并分別在第3、5、7和9天進(jìn)行采樣，檢測齊口裂腹魚前腦中CB1和SPX的mRNA變化情況。結(jié)果顯示:禁食組齊口裂腹魚在第3、5和7天時(shí)前腦中CB1 mRNA的表達(dá)較投喂組顯著升高(P＜0.01);相反地，SPX mRNA水平呈現(xiàn)顯著下降(P＜0.01)。在第7天復(fù)投喂2小時(shí)后，CB1 mRNA表達(dá)水平恢復(fù)正常;而SPX較正常攝食組顯著升高，繼續(xù)投喂至第9天，SPX恢復(fù)到正常投喂組水平。