鴨源性IBVZZ2004株S1和M基因在sf9昆蟲細胞中的表達及表達蛋白的抗原性研究.pdf

1、鴨源性IBVZZ2004是從以生長和免疫抑制為主要癥狀的病鴨體中分離到的一株病毒，該毒株對雞和鴨都有致病性。本研究進行了IBVZZ2004株S1和M基因在sf9昆蟲細胞中的表達，并檢測了表達蛋白的抗原性，為進一步研究這兩種蛋白的生物功能及基因工程疫苗奠定基礎。
　　 根據(jù)IBVZZ2004株病毒的全基因序列，對S1和M基因序列進行分析，分別設計出S1和M基因的特異性引物；采用RT-PCR方法擴增出S1和M基因，經(jīng)瓊脂糖電泳鑒定得

2、到大小約1.6kb和700bp的片段，與預期結果一致。
　　 用限制性內(nèi)切酶分別對S1、M基因和轉(zhuǎn)移載體pFastBacHTA進行雙酶切，酶切后分別回收，于16℃水浴鍋中連接過夜，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞，構建重組轉(zhuǎn)移載體。經(jīng)酶切、PCR和序列測定鑒定正確后，將重組轉(zhuǎn)移載體pFastBacHTA-S1和pFastBacHTA-M分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10Bac感受態(tài)細胞，通過藍白斑法篩選出陽性重組Bacmid，經(jīng)P

3、CR鑒定證明成功構建了重組穿梭載體Bacmid-S1和Bacmid-M；將Bacmid-S1和Bacmid-M分別進行3次純化培養(yǎng)后，再分別轉(zhuǎn)染處于對數(shù)生長期的sf9昆蟲細胞，收獲重組桿狀病毒及病變細胞，檢測S1和M基因的表達；經(jīng)SDS-PAGE和Western-blot檢測獲得大小約64kDa和31kDa的特異性蛋白條帶，免疫熒光檢測Bacmid-S1和Bacmid-M感染的細胞均有特異性熒光。研究結果表明鴨源性IBVZZ2004的S