miR-638通過SPAG1介導調(diào)控豬睪丸支持細胞生長的研究.pdf

1、microRNA(miRNA)能與特定基因結(jié)合，直接降解靶基因的mRNA或者抑制靶基因的翻譯過程，在動植物體內(nèi)發(fā)揮重要的調(diào)控作用。大量的研究表明，在動物睪丸組織中miRNA對睪丸的發(fā)育和成熟及精子發(fā)生過程發(fā)揮至關重要的作用。我們課題組前期經(jīng)過測序分析已經(jīng)證實miR-638在大白豬性成熟前后睪丸組織中差異表達;miR-638能夠靶向精子相關抗原1（Sperm-associated antigen1，SPAG1）基因，并對公豬睪丸支持細胞的

2、凋亡有一定的影響。在這些基礎上，本課題以miR-638為主要研究對象，探究miR-638對豬睪丸ST細胞生長的影響以及在豬精子發(fā)生過程中的作用，并探究相關分子調(diào)控機制。本課題主要研究結(jié)果如下:
　　1.miR-638和靶基因SPAG1對ST細胞功能的影響
　　通過合成miR-638mimic和inhibitor分別來超表達miR-638和抑制表達miR-638。通過構(gòu)建靶基因SPAG1的干擾片段SPAG1-siRNA來抑制表

3、達SPAG1基因。
　　通過流式細胞儀檢測miR-638對ST細胞周期的影響，實驗結(jié)果表明:超表達miR-638可以抑制ST細胞周期S期的比例，抑制ST細胞由G1期向S期的轉(zhuǎn)化;抑制表達SPAG1基因同樣也可抑制ST細胞周期S期的比例，抑制G1期向S期的轉(zhuǎn)化。實驗結(jié)果表明，miR-638和靶基因SPAG1對ST細胞的作用效果相似，說明miR-638通過靶基因SPAG1對ST細胞的細胞周期產(chǎn)生影響。通過MTT法檢測了miR-638對

4、ST細胞增殖的影響，實驗結(jié)果表明:超表達miR-638可以顯著抑制ST細胞增殖，抑制表達miR-638可以顯著促進ST細胞的增殖。
　　2.miR-638調(diào)控ST細胞生長的分子機制研究
　　通過Q-PCR和Western blot實驗檢測miR-638對細胞周期調(diào)控相關基因的影響，實驗結(jié)果表明:超表達miR-638能抑制ST細胞中c-MYC、CCNE1、CCND1和CDK4的表達水平;同樣，抑制表達SPAG1抑制c-MYC、

5、CCNE1、CCND1和CDK4的表達水平。
　　通過Western blot檢測miR-638和靶基因SPA G1對PI3K/AKT通路的作用，實驗結(jié)果表明:超表達miR-638能夠抑制ST細胞中PI3K和AKT蛋白質(zhì)磷酸化水平，抑制表達miR-638能夠促進PI3K和AKT蛋白質(zhì)磷酸化水平;同樣，抑制表達SPAG1可以抑制ST細胞中PI3K和AKT蛋白質(zhì)磷酸化水平。
　　3.SPAG1對細胞有絲分裂的影響
　　通過