分節(jié)絲狀菌Segmented filamentous bacteria(SFB)與肉雞腸道黏膜免疫系統(tǒng)的關(guān)系及其體外培養(yǎng).pdf

1、分節(jié)絲狀菌segmented filamentous bacteria(SFB)是廣泛存在于人或多種脊椎動(dòng)物腸道內(nèi)的一類形態(tài)結(jié)構(gòu)特異的“土著”細(xì)菌。盡管早在1849年，leidy就在白蟻腸道內(nèi)觀察到了一種“內(nèi)生植物體”狀細(xì)菌，但是直到現(xiàn)在，人們?nèi)匀晃茨茉隗w外培養(yǎng)這種腸道微生物。然而悉生動(dòng)物模型研究證明SFB直接參與宿主腸道免疫系統(tǒng)的成熟，尤其是影響宿主免疫球蛋白SIgA的分泌，這表明SFB可能直接參與幼小動(dòng)物天然免疫系統(tǒng)的成熟。所以，S

2、FB的研究引起了科學(xué)家們的廣泛興趣。因此深入研究SFB的體外培養(yǎng)以及其與宿主之間的相互關(guān)系，對開發(fā)新一代微生態(tài)免疫調(diào)節(jié)劑有著重要的現(xiàn)實(shí)與應(yīng)用意義。
　　 由于傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)的方法非常有限，以致于到目前為止分節(jié)絲狀菌(SFB)還未能進(jìn)行純培養(yǎng)，而且其生活環(huán)境非常復(fù)雜，因此本研究主要內(nèi)容包括建立分子生物學(xué)方法對AA肉雞腸道內(nèi)的分節(jié)絲狀菌進(jìn)行原位雜交(FISH)和定量計(jì)數(shù)(Real-timePCR)，同時(shí)在AA肉雞的生長過程中采用不同的

3、干預(yù)方法，研究SFB與宿主免疫之間的關(guān)系。另外還運(yùn)用腸道微生態(tài)體外模擬模型進(jìn)行分節(jié)絲狀菌(SFB)的體外培養(yǎng)。具體結(jié)果如下：
　　 1、建立了肉雞腸道分節(jié)絲狀菌的熒光原位雜交(FISH)、熒光定量PCR(qPCR)和變形梯度凝膠電泳(DGGE)的檢測方法，檢測SFB在腸道不同解剖位置的分布及隨肉雞生長的動(dòng)態(tài)變化情況。結(jié)果表明，SFB主要分布在AA肉雞回腸末端的黏膜表面，在肉雞的生長過程中，SFB的出現(xiàn)和消失也存在一定的規(guī)律性。<

4、br>　　 2、檢測AA肉雞不同干涉組中腸道黏膜表面SIgA含量和SFB數(shù)量隨日齡的變化情況。在本試驗(yàn)中將剛出殼的AA肉雞隨機(jī)分為三組，CL(對照組)、CTX(免疫抑制組)、LAC(乳酸菌組)，通過檢測各組雞的體重及白血球的數(shù)量來確定干預(yù)作用的效果，我們檢測了三組不同日齡的AA肉雞腸道回腸末端粘膜表面SIgA含量，發(fā)現(xiàn)CTX組隨著日齡的升高SIgA的含量也有增高的趨勢，而CL和LAC組回腸末端粘膜表面SIgA的含量在第9-13天時(shí)達(dá)到

5、最高，之后逐漸降低到一定的水平。同時(shí)我們用FISH和Real-time PCR方法對SFB做了檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)LAC組中SFB占總菌數(shù)的百分含量出現(xiàn)最高峰的時(shí)間要比CL、CTX都要早，此外，隨著日齡的升高，LAC、CL組中的SFB逐漸降低，而CTX組中SFB卻是逐漸升高的趨勢，但當(dāng)?shù)搅烁缮婧笃冢淖兠庖咭种苿┑暮繒r(shí)，SIgA的含量迅速升高使得SFB的含量迅速降低到正常水平，由此可見SIgA對調(diào)節(jié)SFB的數(shù)量有一定的作用。
　　

6、3、嘗試對SFB菌群的體外厭氧連續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)，包括對培養(yǎng)基的優(yōu)化及培養(yǎng)條件的進(jìn)一步摸索。通過腸道微生物體外培養(yǎng)模型對分節(jié)絲狀菌(SFB)進(jìn)行體外培養(yǎng)，嘗試不同離子及抗生素對分節(jié)絲狀菌(SFB)的影響，結(jié)果表明，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基(HBCT)中，參入K+、Mg2+、Ca2+離子，培養(yǎng)至第7天，用FISH方法能夠檢測到SFB的存在，Co2+、Cu2+等離子則沒有SFB雜交信號(hào)。在離子培養(yǎng)基中(IL)，加入環(huán)磷酰胺、卡那霉素、氨芐青霉素，培養(yǎng)至第7天