高致病性PRRSV GD強(qiáng)弱毒感染豬外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化及雙重?zé)晒舛縍T-PCR鑒別方法的建立.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的各個(gè)年齡的豬的繁殖與呼吸障礙疾病。PRRS對養(yǎng)豬業(yè)危害很大，經(jīng)濟(jì)損失可觀，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為必須報(bào)告的疫病，我國將其列為二類動(dòng)物疫病。在我國，HP-PRRSV弱毒疫苗的研制與運(yùn)用為高致病性豬繁殖與呼吸綜合征的防控發(fā)揮了重要的作用。但是對PRRSV弱毒疫苗的免疫機(jī)理的研究鮮有報(bào)道。本研究運(yùn)用血常規(guī)技術(shù)和流式細(xì)胞技術(shù)分析了PRRSV感染SPF豬后，豬體內(nèi)外周血

2、淋巴細(xì)胞亞群變化，從細(xì)胞水平探討PRRSV GD強(qiáng)弱毒感染對外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響。從免疫學(xué)的方面探討PRRSV弱毒疫苗對豬體的影響，從而為疫苗的研制提供參考。
　　 PRRSV疫苗研制出來后與強(qiáng)毒株的鑒別問題勢在必行。根據(jù)Genbank中登錄的39株高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)全基因序列和PRRSV疫苗株(GDr180株)全基因序列的比對結(jié)果，在PRRSV Nsp2和Orf7基因的保守區(qū)找到可區(qū)分鑒別PRRS

3、V GDr180株與其他PRRSV毒株的特異性位點(diǎn)，通過設(shè)計(jì)MGB探針，建立了雙重實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法。通過對PRRSVGDr180株和GD強(qiáng)毒株病毒液、感染豬血清和組織樣品檢測證明了該方法的可行性；用雙重實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法檢測PRRSV GDr180株病毒液時(shí)，其敏感性達(dá)到19.4copies/μL，在檢測GD強(qiáng)毒株時(shí)敏感性達(dá)到34.2copies/μL，證明了該方法具有良好的敏感性；通過對PRRSV其他8個(gè)毒株的檢