HMC毒素對(duì)專(zhuān)化寄主細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用.pdf

1、玉米小斑病是當(dāng)前國(guó)內(nèi)外玉米生產(chǎn)區(qū)普遍流行的一種真菌性病害，在致病過(guò)程中能產(chǎn)生對(duì)其寄主植物具有致病活性的代謝產(chǎn)物，即致病毒素。玉米小斑病菌對(duì)玉米的專(zhuān)化侵害與玉米雄性不育胞質(zhì)類(lèi)型有關(guān)。通常情況下，玉米小斑病菌C小種專(zhuān)化侵害C型細(xì)胞質(zhì)雄性不育玉米：玉米小斑病菌T小種專(zhuān)化侵害T型細(xì)胞質(zhì)雄性不育玉米。本文主要研究了玉米小斑病菌C小種產(chǎn)生的毒素(HMC-toxin)對(duì)C型細(xì)胞質(zhì)雄性不育玉米細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。主要研究結(jié)果如下： (一)研究H

2、MC毒素對(duì)專(zhuān)化寄主根冠細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。以?xún)蓪?duì)同核異質(zhì)玉米(B37和Mo17)的根冠細(xì)胞為材料，即B37、Mo17的正常保持系(B37-N，Mo17-N)及其C型細(xì)胞質(zhì)雄性不育系(B37-C，Mo17-C)；隨機(jī)分為四組，其中三組分別用50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL的HMC毒素處理，另外一組用pH6.5的PBS緩沖液作對(duì)照，處理時(shí)間為1h、4h、7h，觀察處理后根冠細(xì)胞的凋亡特征及細(xì)胞凋亡率的變化趨勢(shì)。結(jié)果表明：處

3、理后的玉米根冠細(xì)胞均出現(xiàn)不同程度的凋亡現(xiàn)象，熒光顯微鏡下可觀察到凋亡小體、染色體邊集或環(huán)狀染色體等凋亡特征。采用吖啶橙(AO)和溴化乙啶(EB)復(fù)染或Hoechst33258染色統(tǒng)計(jì)各處理的細(xì)胞凋亡率，發(fā)現(xiàn)相同濃度下，B37-C、Mo17-C玉米根冠細(xì)胞的凋亡率顯著高于B37-N、Mo17-N。另外，隨著處理時(shí)間和濃度的增加，細(xì)胞凋亡率不斷增加；且C細(xì)胞質(zhì)玉米根冠細(xì)胞的凋亡率顯著高于N細(xì)胞質(zhì)玉米。 (二)以?xún)蓪?duì)同核異質(zhì)玉米(B3

4、7和Mo17)原生質(zhì)體為材料，研究HMC毒素對(duì)專(zhuān)化寄主細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。將原生質(zhì)體隨機(jī)分為四組，其中三組分別用50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL的HMC毒素處理，另外一組用等滲液作為對(duì)照；處理時(shí)間為1h、3h、6h，觀察處理后原塵質(zhì)體的凋亡特征及細(xì)胞凋亡率的變化趨勢(shì)。結(jié)果表明：處理后的玉米原生質(zhì)體均出現(xiàn)不同程度的凋亡現(xiàn)象，熒光顯微鏡下可觀察到凋亡小體、染色體邊集或環(huán)狀染色體等凋亡特征。統(tǒng)計(jì)各處理的細(xì)胞凋亡率，發(fā)現(xiàn)相同濃

5、度下，B37-C、Mo17-C玉米原生質(zhì)體的凋亡率顯著高于B37-N、Mo17-N。另外，隨著處理時(shí)間和濃度的增加，細(xì)胞凋亡率不斷增加；且C細(xì)胞質(zhì)玉米原生質(zhì)體的凋亡率顯著高于N細(xì)胞質(zhì)玉米。 (三)以?xún)蓪?duì)同核異質(zhì)玉米(B37和Mo17)葉片為材料，用200μg/mL、250μg/mL、300μg/mL的HMC毒素分別處理3h、6h、9h、12 h、15 h，用pH6.5的PBS緩沖液處理作為對(duì)照，研究HMC毒素處理后不同玉米基因組

6、DNA的降解情況。結(jié)果表明：對(duì)B37-C玉米葉片，出現(xiàn)明顯DNA-ladder現(xiàn)象時(shí)HMC毒素的處理濃度為200μg/mL；處理時(shí)間為6h。對(duì)B37-N玉米葉片，出現(xiàn)明顯DNA-ladder現(xiàn)象的HMC毒素的處理濃度為200μg/mL；處理時(shí)間為9h，比HMC毒素對(duì)B37-C玉米葉片的處理時(shí)間長(zhǎng)。對(duì)Mo17-C玉米葉片，出現(xiàn)明顯DNA-ladder現(xiàn)象的HMC毒素的處理濃度為250μg/mL；處理時(shí)間為12 h。對(duì)Mo17-N玉米葉片，