海南興隆水牛疾病相關(guān)基因的克隆、原核表達(dá)和組織表達(dá)分析.pdf

1、興隆水牛是海南著名的地方水牛品種，具有耐濕熱、抗病力強(qiáng)等特性，有較高的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖價(jià)值。由于缺乏資源保護(hù)意識(shí)，現(xiàn)有興隆水牛品種資源退化，抗病力不斷下降，這對(duì)其生產(chǎn)性能和產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生了較大影響，造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。傳染疾病的發(fā)生已成為影響水牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的主要因素，而對(duì)水牛疾病相關(guān)蛋白的研究將有助于提高水牛對(duì)疾病的綜合抗性，并指導(dǎo)其養(yǎng)殖。
　　 Toll樣受體(Toll-like receptors，TLR)是天然免疫系統(tǒng)中重要的

2、模式識(shí)別受體(Pattern recognition receptors，PRRs)，可以識(shí)別多種病原相關(guān)分子模式(Pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)，并參與中風(fēng)、感染、腫瘤和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等疾病相關(guān)的破壞性炎癥過(guò)程。Toll樣受體2(Toll-like receptor2，TLR2)是TLR家族重要成員之一，可以調(diào)節(jié)或控制先天與獲得性免疫，識(shí)別廣泛的PAMPs。其在結(jié)核分枝桿菌和革

3、蘭氏陽(yáng)性菌的識(shí)別中發(fā)揮重要功效，在內(nèi)源性配體的識(shí)別和自身免疫性疾病的發(fā)展中也起著重要作用。髓樣分化因子88(Myeloid differentiationprimary response protein88，MyD88)是TLR信號(hào)通路中重要的接頭蛋白，也是信號(hào)向下游轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵靶分子。最近的研究表明MyD88可能在創(chuàng)傷性腦損傷后的炎癥和病變發(fā)展中起重要作用?；谝陨显?，對(duì)TLR2和MyD88的研究將有助于指導(dǎo)TLR參與的重病牲畜和人的

4、臨床治療，對(duì)TLR信號(hào)通路的調(diào)節(jié)有可能成為炎性免疫性疾病新的治療策略。本研究通過(guò)RT-PCR技術(shù)從海南興隆水牛中分別擴(kuò)增出TLR2、MyD88 cDNA序列，其開放閱讀框分別為2355 bp和891 bp。對(duì)TLR2基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，并對(duì)MyD88進(jìn)行了原核表達(dá)，構(gòu)建了pET28a-MyD88表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化E coli BL21(DE3)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，進(jìn)行了Ni柱親和層析純化及Western blotting鑒定，得到

5、一個(gè)帶His·Tag的約39 kDa的重組融合蛋白。
　　 細(xì)胞分裂周期蛋白42(cell division cycle42，Cdc42)是Rho家族蛋白成員，具有GTP酶活性，在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖、生存、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移等方面起分子開關(guān)作用。其異?；顒?dòng)會(huì)導(dǎo)致多種疾病如癌癥的發(fā)生。最近對(duì)Cdc42蛋白的研究主要調(diào)查其在病理生理機(jī)制中的作用，并評(píng)估其在相關(guān)疾病中的治療潛力。本實(shí)驗(yàn)克隆了Cdc42cDNA序列，序列分析顯示其包含1個(gè)576