口蹄疫病毒AF-72株結(jié)構(gòu)蛋白VP1和H-2d限制性T細(xì)胞表位篩選與鑒定.pdf

1、表位肽疫苗作為一種新型疫苗,已成為口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)疫苗研究的熱點(diǎn)之一。由于細(xì)胞免疫在口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)的免疫應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用,而結(jié)構(gòu)蛋白VP1內(nèi)又包含著FMDV的主要抗原位點(diǎn)。因此,篩選和鑒定VP1蛋白有效的H-2Ld限制性T細(xì)胞抗原表位,不僅可為進(jìn)一步研究針對(duì)FMDV自然宿主的T細(xì)胞抗原表位提供方法和依據(jù),也可為進(jìn)一步研制F

2、MDV表位肽疫苗奠定基礎(chǔ)。
　　 本研究通過(guò)擴(kuò)增并測(cè)序,獲得了完整的FMDV AF／72株VP1序列。采用密碼子優(yōu)化表達(dá)方法,在大腸桿菌中高效表達(dá)了該VP1蛋白。經(jīng)過(guò)SDS-PAGE電泳及Western Blotting檢測(cè),其分子量與預(yù)期大小相符合,并且保持了良好的免疫原性。與此同時(shí),利用相關(guān)生物信息學(xué)軟件對(duì)VP1中潛在的H-2Dd、H-2Kd、H-2Ld限制性T細(xì)胞表位進(jìn)行了預(yù)測(cè)分析,初步篩選并合成了30個(gè)10肽片段作為候選

3、表位肽段。將VP1蛋白免疫BALB／c小鼠,制備經(jīng)VP1蛋白致敏的脾淋巴細(xì)胞,與30個(gè)候選表位肽段分別進(jìn)行體外共培養(yǎng)刺激,經(jīng)淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和γ干擾素ELISPOT實(shí)驗(yàn),鑒定出2個(gè)H-2d限制性T細(xì)胞表位,即H-2Kd限制性T細(xì)胞表位pK1(AYHKGPFTRL)和H-2Dd限制性T細(xì)胞表位pD7(TGESADPVTT)。本研究篩選并鑒定了FMDV AF／72株結(jié)構(gòu)蛋白VP1中的H-2d限制性T細(xì)胞表位,為FMDVT細(xì)胞表位的研究提供方