豬瘟病毒套式RT-PCR檢測方法的建立和種豬場豬瘟免疫與凈化研究.pdf

1、豬瘟（classical swine fever；CSF）是由豬瘟病毒（classical swine fever；CSFV）引起的豬的一種高度接觸性傳染病，死亡率非常高。目前，繁殖母豬往往呈現(xiàn)豬瘟病毒持續(xù)性感染狀態(tài)，作為傳染源而長期存在于豬群中，這是規(guī)?；i場豬瘟持續(xù)發(fā)生的一個重要原因。如何準(zhǔn)確的檢測出豬瘟帶毒陽性種豬并及時進(jìn)行淘汰，對于規(guī)?；i場控制甚至消滅豬瘟具有非常重要的意義。在開展種豬群凈化工作的同時，針對仔豬群，應(yīng)當(dāng)采取有效

2、的免疫方案，提高仔豬群的豬瘟抗體水平，以抵御豬瘟病毒對仔豬的感染。因此本研究圍繞著建立能靈敏準(zhǔn)確檢測豬瘟帶毒豬的診斷方法和提高仔豬群的免疫抗體水平開展了以下工作：
　　 1．豬瘟病毒套式RT-PCR檢測方法的建立及其在種豬群豬瘟凈化中的運用
　　 利用序列分析軟件（VectorNT18）對NCBI數(shù)據(jù)庫中不同國家和地區(qū)發(fā)布的29株豬瘟野毒及6株疫苗毒株的E2基因序列及BVDV基因序列的相應(yīng)位置進(jìn)行了比較分析，設(shè)計了兩對引

3、物，外套引物擴增E2基因中目的片段大小為806bp，內(nèi)套引物擴增大小為512bp。經(jīng)各種反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了豬瘟病毒套式RT-PCR檢測方法。結(jié)果表明：該方法的靈敏度與real-time RT-PCR相當(dāng)，比普通RT-PCR提高了100倍；運用該方法對中國獸藥監(jiān)察所提供的19株豬瘟病毒的核酸及6種豬源常見病原的核酸樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，19株豬瘟病毒的核酸樣品檢測均呈陽性，其它樣品則為陰性。
　　 運用本方法對種豬豬瘟疫苗免

4、疫后的扁桃體疫苗毒株帶毒規(guī)律的研究，結(jié)果表明：當(dāng)種豬免疫5頭份豬瘟兔化弱毒細(xì)胞疫苗（750RID）25d之前均存在種豬扁桃體攜帶疫苗毒，免疫30d后進(jìn)行扁桃體活體取樣檢測全部呈陰性。為臨床如何有效的避免疫苗免疫對野毒檢測的影響提供試驗依據(jù)。運用該方法在4個規(guī)?；i場開展豬瘟的凈化工作，共檢測了種豬扁桃體樣品1491份，陽性數(shù)為66份，陽性率為4.43％，并將陽性豬只實行了淘汰。同時對部分陽性樣本進(jìn)行了核酸序列分析，顯示擴增的陽性樣本均為

5、豬瘟野毒株而非疫苗毒株。并對其中某場2008年不同時間送檢的陽性樣本的PCR產(chǎn)物進(jìn)行核酸序列分析。結(jié)果表明，不同時間檢測到的豬瘟陽性樣本屬于同一豬瘟野毒株。以上研究表明，本研究建立的套式RT-PCR方法適用于規(guī)?；i場種豬群豬瘟野毒陽性豬只的剔除，為控制和凈化種豬群豬瘟提供技術(shù)支撐。
　　 2．規(guī)?；i場豬瘟免疫狀況調(diào)查及仔豬的免疫防控
　　 為了調(diào)查規(guī)?；i場豬瘟的免疫方案，比較及評價其免疫效果，本研究將湖北省7個規(guī)模

6、化種豬場作為研究對象，將豬群分為經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬、后備母豬、哺乳仔豬（0～30日齡）、保育仔豬（3～60日齡）和生長豬（61日齡以上）6個群體，并按各豬群5％～8％的比例采血，共采集了1650份血樣，檢測豬瘟抗體。結(jié)果表明：各豬群豬瘟免疫合格率分別為99.55％、96.43％、99.22％、89.88％、81.68％及78.64％，不同免疫方案下，各場豬群表現(xiàn)出不同免疫效果。其中保育仔豬的豬瘟免疫是各豬群中最為薄弱的環(huán)節(jié)。因此開展了某規(guī)