植酸酶處理改善菜籽餅營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的研究【畢業(yè)論文】

1、<p>　　本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）</p><p>　　論文題目：植酸酶處理改善菜籽餅營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的研究</p><p>　　所在學(xué)院 生物與環(huán)境學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí) 生物技術(shù) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </

2、p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 日</p><p>　　畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）誠(chéng)信承諾書</p><p>　　1．本人承諾所上交的畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)），是在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下嚴(yán)格按照學(xué)校和學(xué)院有關(guān)規(guī)定完成的，引用他人的觀點(diǎn)和參考資料均

3、加以注釋和說明。</p><p>　　2．本人鄭重地承諾所上交的畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）沒有抄襲他人研究（設(shè)計(jì)）成果和偽造相關(guān)數(shù)據(jù)等行為。</p><p>　　3．畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）若有侵犯他人知識(shí)產(chǎn)權(quán)的行為，由本人承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。</p><p>　　學(xué)生簽名： </p><p>　　日期： </

4、p><p><b>　　摘 要</b></p><p>　　魚粉作為水產(chǎn)養(yǎng)殖中的主要蛋白來源，但是目前正面臨著短缺問題。菜籽餅作為魚粉代替品有許多的優(yōu)點(diǎn)。但是菜籽餅中含有的抗?fàn)I養(yǎng)因子—植酸，會(huì)影響菜籽餅的使用。本試驗(yàn)?zāi)康氖?，利用植酸酶處理菜籽餅，使菜籽餅中的植酸得到有效的降解。首先通過單因素的方法確定植酸酶使用量，然后在此基礎(chǔ)上通過響應(yīng)面的方法確定最佳的時(shí)長(zhǎng)、溫度、料水

5、化。并且優(yōu)化處理?xiàng)l件。結(jié)果表明：最佳接種量為2000U，最佳時(shí)長(zhǎng)為3h ，最佳溫度為30ºC，最佳料水比為0.5，此時(shí)，菜籽餅的植酸含量降至21.56 mg/g DM。試驗(yàn)表明植酸酶能夠有效降低菜籽餅中的植酸含量，從而提高了菜籽餅的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。</p><p>　　關(guān)鍵詞：植酸酶；植酸；抗?fàn)I養(yǎng)因子；菜籽餅；響應(yīng)面法</p><p><b>　　ABSTRACT</b

6、></p><p>　　Fish meal is the main protein source in aquaculture, but currently facing a shortage. Rapeseed meal as a substitute for fish meal has exhibit the advantages. However, Antinutritional factors in

7、 rapeseed meal inhibitor it use in fish feed. Phytic acid is one the main antinutirtional factor in rapeseed meal. The aim of the present study is to use phytase to degrade the phytic acid in rapeseed meal. The right uni

8、t of phytase used was determined firstly. Then, the response surface method with Box-Be</p><p>　　Key words: Phytase; Phytic acid; Antinutritional factor; Rapseed meal; Response surface methodology</p>

9、<p><b>　　目 錄</b></p><p>　　1 前言錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p><b>　　2 材料與方法7</b></p><p><b>　　2.1 原料7</b></p><p>　　2.1.1 菜籽餅7</p>&

10、lt;p>　　2.1.2 植酸酶7</p><p>　　2.2 試驗(yàn)試劑7</p><p>　　2.3 試驗(yàn)設(shè)備8</p><p>　　2.4 酶解菜籽餅生產(chǎn)工藝9</p><p>　　2.5 植酸酶處理菜籽餅試驗(yàn)9</p><p>　　2.5.1 酶的活化9</p><p>

11、　　2.5.2 植酸酶使用量單因素試驗(yàn)9</p><p>　　2.5.3 植酸酶處理菜籽餅響應(yīng)面試驗(yàn)9</p><p>　　2.6 酶解工藝評(píng)價(jià)指標(biāo)檢測(cè)方法10</p><p>　　3 結(jié)果與分析11</p><p>　　3.1植酸酶使用量單因素試驗(yàn)11</p><p>　　3.2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果12&

12、lt;/p><p><b>　　4 結(jié)論16</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)17</b></p><p><b>　　致 謝18</b></p><p><b>　　1 前言</b></p><p>　　磷是動(dòng)物必

13、需的一種礦物質(zhì)。磷在谷物、豆類和油料等作物中，40%~70%是以植酸的形式存在，但是在單胃動(dòng)物的體內(nèi)，因?yàn)槿狈δ芊纸庵菜岬拿复嬖?，進(jìn)食的植酸不能被分解，就同糞便一道排出體外。如美國(guó)肯塔基大學(xué)經(jīng)過10年的研究也證明，豬對(duì)玉米中的磷只能利用10～20%，豆粕中磷的25～35%，因此，即使飼料中總磷的含量較高，但可能被單胃動(dòng)物利用的有效磷可能不足。植酸帶負(fù)電荷，具有很強(qiáng)大的螯合囊里。在很寬的pH值范圍（3-10）內(nèi)能與Ca2+、Zn2+、Mn

14、2+、K+、Na+、Fe3+、Cu2+、I+等螯合成不溶解的植酸—金屬?gòu)?fù)合物，使這些礦物元素的生物利用率大大降低[1].其次，植酸存在于植物細(xì)胞壁中，與纖維素交織起來阻止胞內(nèi)養(yǎng)分的釋放和被吸收。</p><p>　　并且植酸會(huì)與蛋白質(zhì)、淀粉等結(jié)合不融的復(fù)合物。低于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的酸性蛋白質(zhì)帶正電荷，與帶負(fù)電荷的植酸直接螯合成不溶性的植酸-氨基酸復(fù)合物，降低蛋白質(zhì)的利用率。植酸最易與堿性氨基酸結(jié)合，如賴氨酸、精氨酸、

15、組氨酸。在高于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的偏堿性條件下，蛋白質(zhì)的游離羧基和組氨酸中未質(zhì)子化的咪哇基帶負(fù)電荷，植酸先與Ca、Mg、Zn螯合成不溶解的植酸-金屬?gòu)?fù)合物，再與氨基酸螯合成不溶解的植酸一礦物質(zhì)一氨基酸三元復(fù)合物。這兩類產(chǎn)物都不能被蛋白酶水解，所以同時(shí)影響礦物質(zhì)和蛋白質(zhì)的消化利用率。植酸還可以通過與蛋白質(zhì)結(jié)合而使蛋白質(zhì)的粘度、凝膠特性、乳化能力以及水相中的分散度等物理性質(zhì)均受到不同程度的影響。此外，植酸還可與淀粉，脂肪顆粒結(jié)合，降低這些養(yǎng)分的吸

16、收利用。</p><p>　　在魚體中，則影響魚體對(duì)蛋白質(zhì)的吸收利用。常見的植物蛋白質(zhì)原料如豆粕、菜籽餅和芝麻餅中都含有一定量的植酸，例如：豆粕為10～15g/kg，菜籽餅為50～74g/kg，芝麻餅為24g/kg[2]。植酸與蛋白質(zhì)以及礦物質(zhì)的螯合作用如果發(fā)生在動(dòng)物消化道內(nèi)，影響消化酶的活性，在飼料中添加無機(jī)磷和其他礦物元素還會(huì)加劇這一反應(yīng)。胰蛋白酶、胃蛋白酶、淀粉酶、絡(luò)氨酸酶需要鈣離子存在才能發(fā)揮催化作用，而

17、被植酸螯合的鈣則無效，結(jié)果使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)消化、吸收、利用率降低。所以，除去菜籽餅中的植酸，是有效利用菜籽餅作為魚飼料的必要措施。植酸酶，恰好能有效地分解植酸，使菜籽餅的利用率得到有效的提高。</p><p>　　植酸酶的研究從 20世紀(jì) 60年代就已開始，但由于對(duì)其認(rèn)識(shí)不足，相對(duì)于其他工業(yè)用酶發(fā)展緩慢，到 80年代時(shí) ,飼料中還幾乎不添加任何植酸酶。隨著人們對(duì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)、飼料學(xué)研究的深入和集約化養(yǎng)殖的形成，植酸酶的良

18、好前景得以體現(xiàn)，同時(shí)分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的發(fā)展，使植酸酶的規(guī)?；畠r(jià)生產(chǎn)成為可能，因此在飼料中應(yīng)用植酸酶發(fā)展極為迅速。大量研究表明，在豬、禽日糧中添加植酸酶，每頭豬可增加經(jīng)濟(jì)效益40～50元，并可使飼料中磷的利用率提高 40%～60% ,糞便中磷的排出量減少 30%～50% [5]。因此在飼料中添加植酸酶對(duì)提高畜禽業(yè)生產(chǎn)效益及降低植酸磷對(duì)環(huán)境的污染有重要意義[2-4]。</p><p>　　在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，魚

19、類的飼料的成本費(fèi)用占魚類生產(chǎn)總費(fèi)用的70%左右，所以，降低魚類生產(chǎn)總費(fèi)用的關(guān)鍵在于降低魚類的飼料成本費(fèi)用。而在大多數(shù)魚類的消化道中，植酸酶的含量比在動(dòng)物中的含量更少，所以更加不能有效地利用植物性的飼料蛋白原料[7]。采用植酸酶預(yù)先培養(yǎng)處理豆粕，已經(jīng)被證實(shí)是有效的降解植酸的方法，而且溫度、水份和處理時(shí)間均是顯著的因素[8]，但是目前尚無相關(guān)針對(duì)菜籽餅的研究報(bào)道，因此有必要進(jìn)行這方面的研究，從而提高菜籽餅在水產(chǎn)飼料上的利用價(jià)格。本試驗(yàn)的目的

20、因此是先確定植酸酶處理菜籽餅的最佳使用量，在此基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)的方法，確定植酸酶處理的最佳處理時(shí)長(zhǎng)、溫度和料水比。 </p><p><b>　　2 材料與方法</b></p><p><b>　　2.1 原料</b></p><p><b>　　2.1.1 菜籽餅</b></p>

21、<p>　　試驗(yàn)所用菜籽餅，購(gòu)于中國(guó)正大飼料有限公司，使用之前用高速萬能粉碎機(jī)粉碎。</p><p><b>　　2.1.2 植酸酶</b></p><p>　　試驗(yàn)用植酸酶購(gòu)于上海歐耐施生物技術(shù)有限公司。</p><p><b>　　2.2 試驗(yàn)試劑</b></p><p>　　本研究

22、所采用的主要試劑列于表1。</p><p>　　表1 試驗(yàn)主要試劑一覽表 </p><p><b>　　2.3 試驗(yàn)設(shè)備</b></p><p>　　本研究所采用的主要儀器和設(shè)備列于表2。</p><p>　　表2 試驗(yàn)主要設(shè)備一覽表</p><p>　　2.4 植酸酶處理菜籽餅試驗(yàn)<

23、/p><p>　　2.4.1 酶的活化</p><p>　　酶的活化按陳乃松等[6]描述進(jìn)行并做了一些改進(jìn)，描述如下：稱取磷酸氫二鈉35.61g，用量筒量取1000mL的蒸餾水，把磷酸氫二鈉加入到1000mL的蒸餾水中，攪拌至溶解。稱取21.0g的檸檬酸，用量筒量取1000mL的蒸餾水，把檸檬酸加入到1000mL的蒸餾水中，攪拌至溶解。量取557.5mL的磷酸氫二鈉溶液和442.5mL的檸檬酸

24、溶液，攪拌混勻，制成緩沖液。</p><p>　　緩沖液用數(shù)字pH計(jì)檢測(cè)，用檸檬酸溶液和磷酸氫二鈉溶液，調(diào)配至pH5.4時(shí)，即可。</p><p>　　稱取2g的植酸酶，加入到1000mL的緩沖液中，使植酸酶活化。此時(shí)，植酸酶緩沖液中的植酸酶為10U/mL。</p><p>　　2.4.2 植酸酶使用量的單因素試驗(yàn)</p><p>　　試驗(yàn)設(shè)

25、置5個(gè)水平的植酸酶使用量，分別為0、500、1000、1500和2000U/kg（表3），具體方法為：準(zhǔn)確稱取菜籽餅粉末20g，裝入培養(yǎng)瓶中，按上述所設(shè)置的使用量分別加入0、1、2、3、4mL的植酸酶緩沖液，之后再加入20、19、18、17、14mL的蒸餾水，使培養(yǎng)瓶中的料水比均為1。使用玻璃棒進(jìn)行攪拌直至均勻?yàn)橹?。把培養(yǎng)瓶放入40°C的生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h，培養(yǎng)完成后，把培養(yǎng)瓶拿出，立即放入-80°C的超低溫冰箱中

26、冷凍，使培養(yǎng)瓶中的反應(yīng)停止。在冰箱中冷凍24h之后，拿出培養(yǎng)瓶，揭開蓋子，放入冷凍干燥機(jī)中，冷凍30分鐘，然后冷凍干燥48h，然后檢測(cè)菜籽餅中的植酸含量。每個(gè)試驗(yàn)處理設(shè)二個(gè)重復(fù)。</p><p>　　2.4.3 植酸酶處理菜籽餅響應(yīng)面試驗(yàn)</p><p>　　在確定植酸酶處理菜籽餅最佳的接種量之后，再按照根據(jù)Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法分別設(shè)置菜籽餅處理不同的條件，即時(shí)長(zhǎng)、溫度和料

27、水化（表3），設(shè)計(jì)響應(yīng)面分析法優(yōu)化菜籽餅處理?xiàng)l件，再借助試驗(yàn)設(shè)計(jì)軟件Design Expert（version7.1.3），考察這幾個(gè)因素和因素間的交互作用對(duì)處理菜籽餅樣品中植酸含量影響，并根據(jù)最好的植酸降解效果確定最佳的條件組合。</p><p>　　表3 Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平編碼水平表</p><p>　　準(zhǔn)確稱取菜籽餅粉末20g,裝入培養(yǎng)瓶中，加入4mL植酸酶緩

28、沖液，使培養(yǎng)瓶中的酶單位均為2000U/kg。之后按照試驗(yàn)設(shè)置的料水比（表4）加入不同量的蒸餾水。然后用玻璃棒進(jìn)行攪拌，直至攪拌均勻?yàn)橹?。之后把培養(yǎng)瓶放入的生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)和溫度設(shè)置見表4。培養(yǎng)完成后，把培養(yǎng)瓶拿出，立即放入-80°C的超低溫冰箱中冷凍，使培養(yǎng)瓶中的反應(yīng)停止。在冰箱中冷凍24h之后，拿出培養(yǎng)瓶，揭開蓋子，放入冷凍干燥機(jī)中，冷凍干燥48h，然后檢測(cè)菜籽餅中的植酸含量。每個(gè)試驗(yàn)處理設(shè)二個(gè)重復(fù)。</p

29、><p>　　2.5 酶解工藝評(píng)價(jià)指標(biāo)檢測(cè)方法</p><p>　　選用三氯化鐵-磺基水楊酸混合液作為顏色反應(yīng)試劑，其中三氯化鐵與植酸反應(yīng)使磺基水楊酸所結(jié)合的三氯化鐵減少而發(fā)生褪色反應(yīng)，褪色程度即可說明樣品中的植酸含量，而褪色程度可以在波長(zhǎng)500nm處用分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度，通過作出標(biāo)準(zhǔn)曲線與樣品所得的吸光度即可計(jì)算出樣品中植酸的含量[4]。</p><p>　　樣品

30、處理：準(zhǔn)確稱取1.0g新鮮菜籽餅于100mL錐形瓶中，加入50mL的0.5mol/L HCl，置于恒溫磁力攪拌機(jī)上振蕩2h，再2000rpm離心10min，收集上清液并定容至50mL，備用。</p><p>　　植酸純化分離：用移液槍移取上清液10mL于100mL錐形瓶中，并加入1.0mL 3%NaOH混勻，再加入19mL蒸餾水補(bǔ)足至30mL，震蕩均勻后倒入離子交換柱（D201大孔樹脂離子交換柱）中，然后分別用2

31、0mL蒸餾水和20mL0.05mol/L NaCl溶液洗滌，并以1mL/min的流速洗滌交換柱，除去影響結(jié)果的離子，棄去洗脫液，最后用0.7mol/L NaCl洗脫交換柱，并收集40mL洗脫液，即樣品植酸溶液，待測(cè)。</p><p>　　樣品測(cè)定：稱取植酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品，將植酸鈉配制成500μg/mL的母液，使用之前將母液配成100μg/mL植酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。用移液槍精確吸取標(biāo)準(zhǔn)植酸鈉溶液0、1.0、2.0、3.0、4.

32、0、5.0mL于離心管中，并各加蒸餾水補(bǔ)足至5.0mL，再加入4mL三氯化鐵-磺基水楊酸反應(yīng)液，搖勻，3000rpm離心10min，再靜置10min后，將上清液于OD500nm處測(cè)定其吸光值，并以吸光值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)植酸鈉含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程。</p><p>　　取樣品溶液5.0mL于離心管中，再加入4.0mL，搖勻，3000rpm離心10min，并靜置10min后，將上清液于OD500nm

33、處測(cè)定其吸光值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品所得的吸光值即可得出樣品植酸溶液的含量m0，再根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算出菜籽餅中植酸的含量[9]。計(jì)算公式如下：</p><p>　　菜籽餅中植酸的含量（mg/g）=（m0×40mL×50mL）/（1.00g×5.0mL×10mL）式中m0指樣品所測(cè)得的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上相對(duì)應(yīng)所得的結(jié)果。</p><p><b>

34、　　3 結(jié)果與分析</b></p><p>　　3.1 植酸酶使用量單因素試驗(yàn)</p><p>　　不同植酸酶使用量導(dǎo)致菜籽餅植酸含量的不同（表4，圖1）。未添加植酸酶的菜籽餅植酸含量為44.87 mg/g (基于干物質(zhì))，隨著植酸酶的添加量從500U/kg 增加至2000U/kg,植酸含量相應(yīng)地也從44.87 mg/g降至30.37mg/g。通過分析其相關(guān)性，可得出植酸酶的添

35、加量與菜籽餅中的植酸含量呈負(fù)的線性相關(guān)（R=0.6019）。</p><p>　　表4 不同植酸酶單位處理對(duì)菜籽餅中植酸含量的影響</p><p>　　結(jié)果表示為：平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤差</p><p>　　圖1 菜籽餅中植酸與采用的植酸酶單位的關(guān)系</p><p>　　從表4和圖1可以看出在2000U/kg的植酸酶單位下，植酸酶對(duì)菜

36、籽餅中的植酸含量的影響最大。</p><p>　　3.2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果</p><p>　　Box-Behnken設(shè)計(jì)方案與試驗(yàn)結(jié)果列于表5，包括實(shí)際測(cè)定值和模型預(yù)測(cè)值,其中模型預(yù)測(cè)值由design expert 軟件計(jì)算所得。</p><p>　　對(duì)試驗(yàn)結(jié)果（表5）進(jìn)行二次多元回歸擬合，得到植酸含量對(duì)自變量A（時(shí)長(zhǎng)）、B（溫度）和C（料水比）的二次多項(xiàng)回歸方

37、程：Y=42.06+5.29A+3.58B+6.62C+3.25AB+2.94AC-2.56BC-2.97A2-3.79B2-3.45C2</p><p>　　對(duì)上述回歸模型進(jìn)行方差分析（表6），結(jié)果表明，所得到的模型極顯著（P=0.01），同時(shí)F值為9.51，這表示模型是顯著的，且模型的F值只有1%的可能性是由誤操作引起的。結(jié)果也表明自變量A、B、C在對(duì)植酸的變化起著顯著作用（P＜0.05），其中自變量A、C的

38、作用極為顯著（P<0.01）。同時(shí)自變量之間相互作用均不顯著。失擬的F值為1.79表明回歸模型相對(duì)于純誤差失擬不顯著。R2為0.95，校正R2為0.85，這同樣也說明了模型的顯著性，以上結(jié)果充分說明本試驗(yàn)?zāi)Ｐ涂梢杂脕矸治霾俗扬炛兄菜岬慕到膺^程，以及預(yù)測(cè)植酸含量最低時(shí)自變量A、B和C的值。</p><p>　　表5 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及植酸含量(其中，pH和接種量已為最優(yōu)化值)</p>

39、;<p>　　表6 響應(yīng)面二次模型的方差分析</p><p>　　*表示差異顯著；**表示差異極顯著。</p><p>　　根據(jù)二次回歸模型得到等高線圖（圖2）和三維響應(yīng)面圖（圖3），圖中模坐標(biāo)分別代表時(shí)長(zhǎng)和料水比這兩個(gè)自變量，同時(shí)溫度處于植酸含量最低時(shí)的值。從圖中可以看出，隨著料水比的減少，植酸的含量也在降低。當(dāng)料水比為0.5時(shí)，隨著時(shí)長(zhǎng)從1h增加到3h, 植酸量先升高，

40、再降低。當(dāng)料水比為1.5時(shí)，植酸量隨著時(shí)長(zhǎng)的增加而增加。從本試驗(yàn)?zāi)Ｐ涂梢缘贸鲈谠O(shè)定的變量范圍內(nèi)，預(yù)測(cè)的最低植酸含量為18.18 mg/g干物質(zhì)。此時(shí)的各項(xiàng)自變量分別為：溫度為30℃；時(shí)長(zhǎng)3h；料水比0.5。</p><p>　　圖2 植酸酶處理菜籽餅后植酸含量的響應(yīng)面圖</p><p>　　圖3 植酸酶處理菜籽餅后植酸含量的等高線圖</p><p>　　為了驗(yàn)證

41、所得到最優(yōu)條件，依此優(yōu)化條件進(jìn)行植酸酶菜籽餅的處理試驗(yàn)，試驗(yàn)設(shè)三個(gè)重復(fù)，最后得到菜籽餅中植酸含量為21.56 mg/g DM，與預(yù)測(cè)值（18.18 mg/g DM）接近，驗(yàn)證結(jié)果反映了本響應(yīng)曲面模型的可靠性。</p><p><b>　　4 結(jié)論</b></p><p>　　在本試驗(yàn)的設(shè)定范圍之內(nèi)，添加2000U/kg植酸酶對(duì)菜籽餅中植酸的降解效果最好，此時(shí)，菜籽餅中

42、的植酸含量從44.87 mg/g DM降至30.37mg/g DM。植酸酶處理降解菜籽餅中的最佳條件為：溫度30℃；時(shí)長(zhǎng)3h；料水比0.5，此時(shí)菜籽餅中最低的植酸含量為21.56 mg/g干物質(zhì)。因此，植酸處理菜籽餅?zāi)軌蛱岣卟俗扬灥臓I(yíng)養(yǎng)品質(zhì)，具有在工業(yè)中大規(guī)模處理菜籽餅的潛力。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 高有領(lǐng),汪財(cái)生,

43、朱秋華等.植物蛋白原料抗?fàn)I養(yǎng)因子及其消除方法的研究[J].中國(guó)飼料,2010,(5):11-16. </p><p>　　[2] 何濤,張海軍,武書庚等.現(xiàn)代固態(tài)發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)蛋白飼料研究進(jìn)展[J].飼料工業(yè),2008,(29),1-3.</p><p>　　[3] 丁強(qiáng),楊培龍,黃火清等.植酸酶發(fā)展現(xiàn)狀和研究趨勢(shì)[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科

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48、四年來指導(dǎo)和幫助我的老師和同學(xué)表示衷心的感謝!首先感謝我的指導(dǎo)老師，本論文的設(shè)計(jì)、實(shí)施和撰寫是在導(dǎo)師的悉心指導(dǎo)和全面關(guān)懷下完成的。導(dǎo)師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度、實(shí)事求是的科研作風(fēng)和敏銳的科研思路給我留下了深刻的印象，令我終生受惠。導(dǎo)師在學(xué)習(xí)和生活上所給予的諄諄教海和無微不至的關(guān)懷，更是讓學(xué)生終生難忘。感謝導(dǎo)師在過去三年中為我的成長(zhǎng)傾注的大量心血，在生活上、學(xué)習(xí)上和科研工作上給予的無微不至的關(guān)懷和教侮。借此機(jī)會(huì)，學(xué)生表示衷心的感謝和崇高的敬意！&l