PHA的提取及其復(fù)合中藥多糖的免疫作用初探.pdf

1、在畜禽養(yǎng)殖業(yè)不斷發(fā)展的今天，通過(guò)疫苗免疫來(lái)控制疾病的發(fā)生是非常重要且有效的手段，但是免疫失敗或不完全成功的情況時(shí)有發(fā)生，其原因眾多，除疫苗質(zhì)量、免疫程序等因素外，機(jī)體健康狀況不良、感染免疫抑制性疾病、應(yīng)激、濫用藥物引起慢性中毒等都可以導(dǎo)致畜禽處于亞健康狀態(tài)，而不能對(duì)疫苗刺激作出正常的免疫應(yīng)答，從而導(dǎo)致免疫失敗或不完全成功。同時(shí)近年來(lái)伴隨分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展而涌現(xiàn)出的基因疫苗，因其本身免疫原性差，一般免疫增強(qiáng)劑難以提高其免疫原性。因此研制

2、高效、低毒的新型免疫增強(qiáng)劑己成為亟待解決的問(wèn)題。
　　 植物血凝素（Phytohemagglutinin，PHA）作為一種有絲分裂原，對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)有極強(qiáng)的刺激作用。本文對(duì)PHA的提取工藝進(jìn)行了研究。根據(jù)影響傳統(tǒng)水溶液浸提的各因素設(shè)計(jì)了3組水溶液浸提方案，同時(shí)采用反膠團(tuán)法提取PHA，將二者進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)反膠團(tuán)萃取的血凝效價(jià)和蛋白提取率高于水溶液浸提組，說(shuō)明反膠團(tuán)萃取具有較高的提取率。對(duì)影響反膠團(tuán)萃取的各因素（pH、水相離子

3、強(qiáng)度、萃取時(shí)間）進(jìn)行單因素分析，找到反膠團(tuán)萃取PHA的最佳工藝：水相離子強(qiáng)度為0.15mol?L-1，正萃時(shí)水相pH4～6，萃取時(shí)間為4min，反萃時(shí)水相pH為9～10，萃取時(shí)間8min。采用DEAE Sephadex A-50和Sephadex G150 對(duì)PHA進(jìn)行純化，純化產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳進(jìn)行分析，結(jié)果顯示獲得單一條帶，說(shuō)明獲得電泳純的PHA。
　　 中藥多糖（Chinese Herbal Polysacchar

4、ides，CHPs）的免疫增強(qiáng)作用已被多方面的實(shí)驗(yàn)所證實(shí)。本文采用水提醇沉法提取黃芪多糖（Astragalus Polysaccharides，APS）、板藍(lán)根多糖（Indigowoad Root Polysaccharides，IRP）、茯苓多糖（Poria Wolf Polysaccharides，PWP）、當(dāng)歸多糖（Angelica Sinensis Polysaccharides，ASP），并采用Sevag法除蛋白，大孔樹(shù)脂脫色

5、素，苯酚-硫酸法對(duì)各多糖的含糖量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示四種多糖的含糖量分別為86％、72％、79％、83％。
　　 采用小鼠脾淋巴細(xì)胞體外增殖實(shí)驗(yàn)觀察自提PHA對(duì)淋巴細(xì)胞的刺激作用，發(fā)現(xiàn)PHA終濃度在6.5～200μg?mL-1時(shí)能顯著促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞的增殖，在50μg?mL-1時(shí)達(dá)最大值，以后隨濃度增大而略有下降。觀察自提多糖單獨(dú)或與PHA（亞適劑量12.5μg?mL-1）聯(lián)用對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果表明四種多糖單獨(dú)應(yīng)用均能促進(jìn)

6、淋巴細(xì)胞增殖，與PHA聯(lián)用能起到協(xié)同作用。其中APS單獨(dú)或與PHA聯(lián)用的OD570最高值均最大，因此認(rèn)為APS對(duì)免疫細(xì)胞的刺激作用最強(qiáng)。
　　 檢測(cè)APS與PHA聯(lián)用對(duì)小鼠免疫功能的影響。昆明種小白鼠60只，隨機(jī)分為6組，分別為高、中、低劑量組，PHA對(duì)照組，APS對(duì)照組和空白對(duì)照組。腹腔注射，連續(xù)5d，第7d用碳廓實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠的MФ吞噬指數(shù)，并計(jì)算脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。結(jié)果表明APS與PHA聯(lián)用的中、高劑量能顯著或極顯著地提高小鼠