表達H5AIVHA基因重組雞痘病毒的免疫效力試驗及CEF感染rFPV-SYHA后的動態(tài)定位和超微結(jié)構(gòu)的觀察.pdf

1、重組雞痘病毒活載體疫苗的研究在近十幾年來取得了很大進展，從根本意義上顯示出常規(guī)疫苗無可比擬的優(yōu)勢，已有多種病原的保護性抗原在FPV中得以表達，其中包括表達禽流感HA的重組活載體疫苗。本文對單表達禽流感H5亞型血凝素(HA)基因的的重組雞痘病毒的免疫效力做了評估，并對CEF感染rFPV-H5HA后進行了定位研究。 1.重組雞痘病毒rFPV-SYHA在SPF雞上的免疫效力實驗 將SPF雞隨機分為5組，每組6羽，將rFPV-S

2、YHA用滅菌PBS進行稀釋，免疫劑量分別為2×104、2×103、2×102、20及2 PFU/羽。以頸部皮下注射方式進行免疫。于免疫后的第21天，將SY株AIV經(jīng)PBS稀釋后，以1×105EID50/羽的劑量通過滴鼻點眼途徑進行攻毒。攻毒后連續(xù)觀察兩周，統(tǒng)計發(fā)病死亡情況，并于攻毒后的第2、4和7天對各組雞采集氣管及泄殖腔棉拭子，接種10日齡SPF雞胚做病毒分離試驗。與rFPV(2PFU)免疫組相比，rFPV(2×104 PFU)及全病

3、毒滅活疫苗在攻毒后第4天顯著降低了氣管的排毒率。其它時間點上，各免疫組之間的排毒率無顯著差異。與未免疫攻毒對照組相比，rFPV(2×102 FPU)及以上劑量組均顯著降低了死亡率，其中rFPV(2×104 PFU)免疫組未出現(xiàn)發(fā)病及死亡。rFPV(2×103 PFU)及更低的免疫劑量組均有不同程度死亡。所有試驗雞分別在免疫后6，13，21采血，分離血清，用HI試驗測定血清中的抗體效價。 2.CEF感染rFPV-H5HA后的動態(tài)定

4、位和超微結(jié)構(gòu)的觀察 本實驗運用間接酶免疫組織化學(xué)方對培養(yǎng)的成纖維細胞上接種重組雞痘病毒上表達的HA基因進行定位檢測和直觀判斷，結(jié)果表明抗H5單克隆抗體稀釋濃度為1：200時，免疫染色效果較好。HA蛋白的表達中，胞漿型，胞膜型，胞核型都能見到，最常見的是前兩種，且在接種病毒12小時后才有陽性表達。表達量隨時間的增加并無顯著增加，推測這與重組病毒時所用啟動子有關(guān)。利用透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，CEF細胞感染rFPV-H5HA48h后，才在C