尿液分析的標(biāo)準(zhǔn)化及其尿沉渣定量檢測(cè)技術(shù)新進(jìn)展

1、1,尿液分析的標(biāo)準(zhǔn)化及其尿沉渣定量檢測(cè)技術(shù)新進(jìn)展,2,尿液分析的發(fā)展回顧,1590年荷蘭人詹森發(fā)明了世界上第一臺(tái)復(fù)合顯微鏡 1673年，F(xiàn)rederick Dekkers用加熱醋酸酸化尿液的方法檢測(cè)蛋白 1896年，Daiber出版了他的尿沉渣圖譜 1911年，Benedict提出了穩(wěn)定方便的尿糖檢測(cè)方法Johns Hopkins Hospital 的Charles Emerson發(fā)表名著《臨床診斷》 1956年Alfred

2、Free發(fā)明的CLINISTIX?，尿液分析史上第一個(gè)“浸入即讀”的測(cè)試方法,3,國內(nèi)尿液分析方法回顧,50~60手工化學(xué)分析70~80手工化學(xué)分析尿沉渣鏡檢80~90尿液干化學(xué)分析2K~2K1尿液干化學(xué)分析尿沉渣鏡檢2K2完整的尿液分析= 干化學(xué)+尿流式+鏡檢確認(rèn),4,檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展對(duì)尿液分析的要求,更準(zhǔn)為臨床提供更為準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果更快緩解檢驗(yàn)科不斷增加的樣品量的

3、壓力為臨床提供更為及時(shí)的檢驗(yàn)報(bào)告更多為臨床提供更多的實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo),“應(yīng)對(duì)醫(yī)療糾紛舉證倒置政策對(duì)臨床和檢驗(yàn)科的要求”,5,目前尿液分析所存在的問題,更準(zhǔn)？過分依賴尿液干化學(xué)分析尿沉渣鏡檢的方法學(xué)不精密性樣品處理過程所帶來的干擾人工鏡檢主觀因素的影響更快？單個(gè)樣品：9.75分鐘*批量處理：5.25分鐘*更多？*尿液分析最佳方法,Frank Bailey，ASCP,6,尿液干化學(xué)檢測(cè)方法的局限性,例如：白細(xì)胞：腎

4、移植病人淋巴尿不表現(xiàn)脂酶尿糖：受其它還原物質(zhì)的影響造成假陰性細(xì)菌：只能檢測(cè)革蘭氏陰性桿菌……定性結(jié)果，不能用于療效的監(jiān)測(cè) 結(jié)論：不能代替鏡檢,7,尿沉渣分析的重要性,紅細(xì)胞：泌尿系出血、泌尿系惡變、出血性疾病白細(xì)胞：泌尿系感染、急性腎小球腎炎、腎移植排異上皮細(xì)胞：腎小管病變管型紅細(xì)胞管型：急性腎小球腎炎、腎梗塞白細(xì)胞管型：急性腎小球腎炎、腎綜合癥、腎盂腎炎上皮細(xì)胞管型：腎小管病變，如腎臟疾病、多種中毒透明管型：

5、腎小球毛細(xì)管損害顆粒管型：腎盂腎炎、慢性腎疾病細(xì)菌：泌尿道感染,8,顯微鏡檢查的不精密度,UF-100、CD-3500、計(jì)數(shù)板三種方法對(duì)比 檢測(cè)104份腦脊液在低白細(xì)胞數(shù)的檢測(cè)中， UF-100的CV為4.9% CD-3500的CV為28%鏡檢法的CV為40%,9,不同檢驗(yàn)員間鏡檢結(jié)果的差異,10,顯微鏡檢查的影響因素,標(biāo)本在分析前形態(tài)改變標(biāo)本混合不當(dāng)離心的尿量不同離心速度和時(shí)間不同尿沉渣重懸的液量不同尿

6、沉渣重懸的方法不同鏡檢一滴沉渣的液量不同蓋片或計(jì)數(shù)板的差異視野數(shù)目和位置的差異成份識(shí)別上的人員差異顯微鏡視野大小的差異,,11,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,0,50,100,150,200,250,300,350,400,450,500,RBC count (/,m,L),,,,Sam

7、ple 1,,,Sample 2,,,Sample 3,,,,,,,Sample 4,,,,,,,,,Sample 5,原液,400G, 5min,500G, 5min,500G, 15min,不同離心條件上清液中RBC的殘留量,12,尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化的建議,標(biāo)本的收集及運(yùn)送2.2 標(biāo)本的運(yùn)送 按上述要求留取尿液應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)完成檢驗(yàn)。尿沉渣檢驗(yàn)的操作步驟3.2 鏡檢 計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)或管型，按××/µl報(bào)

8、告。材料與器械1.5 自動(dòng)化設(shè)備 有條件的實(shí)驗(yàn)室也可使用各類自動(dòng)、半自動(dòng)的尿沉渣分析儀作為尿沉渣分析，或用作過篩，但此類儀器必須經(jīng)權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)可。,13,各種改良的鏡檢系統(tǒng),14,DiaSys R/S2000系統(tǒng),15,國聯(lián)在線UD-S自動(dòng)染色工作站,,16,普利生AMP2000自動(dòng)掃描式尿沉渣工作站,,,17,DiaSys R/S2000系統(tǒng),主要部件為一個(gè)玻璃的光學(xué)計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)板固定在顯微鏡上并連接一個(gè)加樣泵尿液標(biāo)本首先按照常

9、規(guī)步驟進(jìn)行處理將加樣管插入離心管的底部，啟動(dòng)加樣泵吸取180微升的沉渣并利用渦流混合重懸在加樣泵作用下尿沉渣流入檢測(cè)區(qū)，分布在光學(xué)計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)后，系統(tǒng)自動(dòng)用700微升的鹽水沖洗管路和計(jì)數(shù)板以防止交叉污染,18,為什么要使用全自動(dòng)尿沉渣分析儀？,19,目前尿液分析所存在的問題,更準(zhǔn)？過分依賴尿液干化學(xué)分析尿沉渣鏡檢的方法學(xué)不精密性樣品處理過程所帶來的干擾人工鏡檢主觀因素的影響更快？單個(gè)樣品：9.75分鐘*批量處理：5.

10、25分鐘*更多？*尿液分析最佳方法,Frank Bailey，ASCP,20,為什么要使用全自動(dòng)尿沉渣分析儀？,徹底排除樣品處理過程的干擾因素以及人工鏡檢主觀因素的影響，提高分析中質(zhì)量控制提高篩選效率，保證樣品的質(zhì)量，強(qiáng)化分析前質(zhì)量控制,21,全自動(dòng)尿沉渣分析儀UF-100/UF-50,22,全自動(dòng)尿沉渣分析儀,,23,結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好,UF-100 和人工鏡檢法精密度比較（n=10）,24,9-氮雜菲（Phenanthrid

11、ine）染色DNA和RNA發(fā)射熒光為: 橙色對(duì)死細(xì)胞胞膜穿透性強(qiáng)羰花青（Carbocyanine）細(xì)胞膜、核膜以及線粒體等膜性物質(zhì)被染色發(fā)射熒光為：綠色,特異的熒光染色技術(shù),25,彩色打印報(bào)告-臨床報(bào)告,26,彩色打印報(bào)告-科研報(bào)告,27,質(zhì)量控制,28,臨床應(yīng)用血尿來源的鑒別診斷,,29,紅細(xì)胞信息,,,,,80 100 ch,80 100

12、 ch,30,UF-100對(duì)血尿來源的判斷,Toru Hyodo, Kazuo Kumano et al. Detection of glomerular and non-glomerular red blood cell by automated urinary sediment analyzer. Jpn J Nephrol 37:35-43,1995. UF-100：敏感性 1

13、00％， 特異性 92.54%* 鏡檢法： 敏感性 95.83%，特異性 93.33%馬駿龍，叢玉隆等。全自動(dòng)尿沉渣分析儀檢測(cè)尿紅細(xì)胞鑒別血尿來源的探討。中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志 V20 (5), 1997。 UF-100：敏感性 100％， 特異性 78.2% *Hyodo所選非腎小球病變對(duì)象排除了血尿同時(shí)伴菌尿病人,31,臨床應(yīng)用藥物治療療效的觀察,,32,臨床應(yīng)用－急性腎盂腎炎,33,臨床應(yīng)用－輸尿管結(jié)

14、石，腎盂腎炎,34,臨床應(yīng)用－腎病綜合癥,35,臨床應(yīng)用用于檢測(cè)腦脊液中的白細(xì)胞,36,尿流式細(xì)胞儀檢查腦脊液中白細(xì)胞,UF-100、CD-3500、計(jì)數(shù)板三種方法對(duì)比 檢測(cè)104份腦脊液在低白細(xì)胞數(shù)的檢測(cè)中， UF-100的CV為4.9% CD-3500的CV為28%鏡檢法的CV為40%,Reinhard Ziebig, Andreas Lun, Pranav SinHA. Leukocyte Counts in

15、Cerebrospinal Fluid with the Automated Hematology Analyzer CellDyn 3500 and the Urine Flow Cytometer UF-100. Clinical Chemistry 46:2 242~247 (2000),37,流式細(xì)胞儀分析腦脊液標(biāo)本,UF-100及顯微鏡檢測(cè)紅細(xì)胞有好的相關(guān)性，r=0.919UF-100與白細(xì)胞的相關(guān)性為r=0.886UF

16、-100與細(xì)菌的相關(guān)性為r=0.605，CSF出血標(biāo)本細(xì)菌計(jì)數(shù)不可信顱咽管瘤病人的CSF中新形隱球菌、酵母菌及膽固醇結(jié)晶可檢測(cè)出,JosT.Van Acker, Joris R. Delanghe et al. Automated Flow Cytometric Analysis of Cerebrospinal Fluid. Clinical Chemistry 47:3 556-560 (2001),38,UF在常規(guī)工作中的作用,

17、UF的快速篩選功能大大降低人工鏡檢的工作量解決陽性樣品的漏檢問題，避免了醫(yī)療糾紛定量的標(biāo)準(zhǔn)化報(bào)告方式大大提高結(jié)果的準(zhǔn)確性適用于臨床治療監(jiān)測(cè) 提供新的臨床信息RBC形態(tài)信息，用于血尿來源的鑒別診斷,39,簡(jiǎn)化工作流程,沒有UF,有了UF,報(bào)告,報(bào)告,報(bào)告,40,試紙條篩選、沉渣分析、化學(xué)定量、微生物檢查等是尿液分析不可缺少的內(nèi)容。采用自動(dòng)化儀器對(duì)這些顆粒進(jìn)行分析是減少手工操作，滿足臨床尿也分析所需要的檢驗(yàn)方法。Kouri