消化性潰瘍藥

1、消化性潰瘍藥,一、實驗設(shè)計的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ) 消化性潰瘍主要指發(fā)生于胃和十二指腸的慢性潰瘍，臨床以上腹部劍突以下，臍以上胃脘部經(jīng)常發(fā)生疼痛為主癥。屬中醫(yī)“吞酸”、“胃脘痛”之范疇。 有關(guān)消化性潰瘍病的病因病機(jī)尚未完全清楚。一般認(rèn)為潰瘍的形成主要由于胃、十二指腸黏膜的防御因素和攻擊因素的平衡失調(diào)所致。攻擊因素主要是指胃酸、胃蛋白酶以及近年提出的幽門螺旋桿菌；防御因素則包括粘液——碳酸氫鹽屏障、胃黏膜血流、胃上皮更新和內(nèi)生性前列腺

2、素等。任何原田導(dǎo)致攻擊因素加強(qiáng)和(或)防御因素減弱時，均可導(dǎo)致潰瘍發(fā)生。 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對消化性潰瘍的治療一般可分為二個方面：抑酸、強(qiáng)化黏膜防衛(wèi)和抗菌治療。中醫(yī)認(rèn)為本病的病因病機(jī)主要有情志所傷，飲食勞倦等方面。本病病位在胃，與肝、脾關(guān)系最為密切。在病機(jī)轉(zhuǎn)化方面，具有由氣及血，由實轉(zhuǎn)虛，寒熱轉(zhuǎn)化、化熱傷陰之特點(diǎn)，臨證多從肝郁、脾虛、胃熱、氣滯、血癌及胃陰虧損進(jìn)行辨證，采用疏肝、健脾、清熱、理氣、化瘀、養(yǎng)陰之法。,,二、藥效學(xué)研究的實驗設(shè)

3、計 (一)對潰瘍病模型的防治作用試驗 1．常用動物模型 (1)應(yīng)激性胃潰瘍模型：通過應(yīng)激引發(fā)，如束縛、冷凍、饑餓、燙傷等。 (2)幽門結(jié)扎法潰瘍模型：通過手術(shù)結(jié)扎幽門的方法而形成潰瘍。 (3)藥物性潰瘍模型：如利血平模型、吲哚美辛潰瘍模型、阿司匹林潰瘍模型均通過相應(yīng)藥物的作用而產(chǎn)生潰瘍。 (4)化學(xué)性潰瘍模型：慢性乙酸潰瘍模型、無水乙醇、鹽酸、氫氧化鈉潰瘍模型，這些模型均為這些物質(zhì)直接損傷

4、胃黏膜而形成潰瘍。 以上潰瘍模型，除乙酸潰瘍模型外，其余均為急性潰瘍模型，前者通常作為觀察藥物對潰瘍的愈合作用，后者則作為觀察藥物對潰瘍發(fā)生情況及程度的影響。,2．觀察指標(biāo) (1)潰瘍愈合情況應(yīng)是評價新藥療效的最主要指標(biāo)。這通常是對慢性潰瘍模型而言。衡量潰瘍愈合的指標(biāo)有潰瘍面積或潰瘍體積、潰瘍愈合率。哪種表示更科學(xué)，應(yīng)根據(jù)藥物作用強(qiáng)度以及潰瘍愈合程度而定。 (2)潰瘍指數(shù)及潰瘍發(fā)生率常作為評價藥物對各種潰瘍模型作

5、用的指標(biāo)。特別是對急性潰瘍模型。前者常為評價潰瘍的輕重程度，后者則衡量潰瘍發(fā)生情況。潰瘍指數(shù)的評定標(biāo)準(zhǔn)及方法視不同的潰瘍模型而不同。 (3)其他可供分析的指標(biāo)：胃黏膜出血程度，急性潰瘍模型如應(yīng)激潰瘍、藥物潰瘍、化學(xué)致壞死性損傷物質(zhì)引起的胃黏膜損傷常為出血性損傷，出血的程度與胃黏膜損傷程度相關(guān)。但由于實際操作不易測量出血量，可以“+”分級表示輕重程度，作為輔助指標(biāo)。,3．方法學(xué)評價 上述各種潰瘍模型，由于造模方法和發(fā)生機(jī)制不同，

6、模型中各有特點(diǎn)?？筛鶕?jù)新藥的功能主治選擇。 (1)慢性乙酸法潰瘍模型：—般認(rèn)為潰瘍的病理形態(tài)特點(diǎn)與修復(fù)過程類似人類消化潰瘍。潰瘍發(fā)生率達(dá)100％，潰瘍在胃腸任何部位均可造成，潰瘍持續(xù)長，自愈約需 60—100日，在較長時間內(nèi)觀察藥物治療的效果等，因此，該模型適用各種證型藥物的觀察。是評價藥物對潰瘍愈合作用的較為理想的潰瘍模型。 (2)幽門結(jié)扎潰瘍模型：主要發(fā)生機(jī)制為潴溜的胃液對胃的消化作用及由于結(jié)扎幽門引起的血液循環(huán)障礙

7、所致、與人類消化性潰瘍的“自身消化”吻合，與中醫(yī)的氣滯血淤有—定的聯(lián)系 由于操作方法簡單易行，潰瘍發(fā)生率高，幾達(dá)100％，因此廣泛用于抗?jié)兯幬镅芯浚m合于各類證抗?jié)兯幬?，特別是活血化瘀、理氣行氣類藥物的抗?jié)冏饔糜^察。,(3)應(yīng)激性潰瘍模型：與人類應(yīng)激性潰瘍十分相似，此模型的發(fā)生機(jī)制比較復(fù)雜，一般認(rèn)為應(yīng)激作用使大腦皮層的興奮與抑制過程失調(diào)，引起皮層下功能紊亂從而導(dǎo)致神經(jīng)和下丘腦—垂休—腎上腺皮質(zhì)的調(diào)節(jié)功能紊亂．使胃肌痙攣、胃血液循

8、環(huán)障礙，胃分泌增加而導(dǎo)致潰瘍形成。人類由于嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷等可產(chǎn)生急性應(yīng)激性潰瘍，精神過度緊張，強(qiáng)烈的情緒激動導(dǎo)致潰瘍的發(fā)生或復(fù)發(fā)。與中醫(yī)肝郁型自主神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂有一定的聯(lián)系。同此該模型適于疏肝理氣、疏肝清熱、活血化瘀類藥物的觀察 (4)利血平潰瘍模型：機(jī)制是由刺激5—HT和(或)組胺的釋放，或激活甾體類激素的釋放，引起過多的胃液分泌以及胃壁的血管運(yùn)動變化。此模型的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、發(fā)病率高，缺點(diǎn)是潰瘍比較表淺。適于脾胃虛弱之益氣

9、健脾藥物的觀察。 (5)吲哚美辛、阿司匹林潰瘍模型：主要機(jī)制是抑制胃黏膜細(xì)胞內(nèi)前列腺系統(tǒng)，細(xì)胞保護(hù)作用減弱有關(guān)。它優(yōu)點(diǎn)是憒瘍發(fā)生率高，再現(xiàn)性好，缺點(diǎn)是比較表淺，適合各種證型藥物的觀察。 (6)強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、無水乙醇引起的潰瘍模型：發(fā)生機(jī)制為直接損傷胃黏膜而形成潰瘍。此類模型較偏重有關(guān)加強(qiáng)胃黏膜防衛(wèi)作用藥物的試驗。適用于清熱、解郁、益氣健脾、益氣養(yǎng)陰類藥物的觀察。,(二)其他試驗 1． 胃分泌試驗 抑酸常是消化性

10、潰瘍藥物的作用環(huán)節(jié)之—?？捎^察藥物對胃酸、胃蛋白酶分泌的影響，包括胃液分泌量、游離酸度、總酸排量(單位時間內(nèi))、胃蛋白酶排出量。方法有大鼠幽門結(jié)扎法收集胃液進(jìn)行分析，也采用在體胃灌流法等。 2 胃黏膜血流量 胃黏膜血流不僅在胃黏膜的防御機(jī)制中起著主要的作用，而且對潰瘍病灶的修復(fù)必不可少，因此，測定藥物對胃膜血流的影響，也可作為藥物藥效的輔助指標(biāo)之一。胃黏膜血流量的測定需要掌握一定的技術(shù)和一定的設(shè)備。常用的方法有中性紅清除法、

11、多普勒激光血流測定法、氧離子廓清法等。 3 胃黏液測定 胃黏液屏障在胃黏膜抗損傷中起到第一道防線的作用，是胃黏膜的防衛(wèi)因素之一，中藥治療消化性潰瘍的作用之一是通過影響胃黏液的分泌，因此，觀察藥物對胃黏液含量的影響也可作為藥效研究的輔助指標(biāo)。通常采用阿利新蘭糖蛋白結(jié)合法分別測胃黏液的含量以及胃液中游離黏液的含量，以胃壁黏液較有意義。 4 抗炎鎮(zhèn)痛試驗 炎癥是消化性潰瘍病的病理特特征之一，疼痛往往由炎癥引起。具有消炎

12、、止痛作用的藥物有利于潰瘍病的修復(fù)，可以選擇炎癥模型如腹腔毛細(xì)血管通透性模型、炎癥腫脹模型、足腫脹模型；疼痛模型如醋酸扭體、熱板法、解痙試驗等為藥效輔助指標(biāo)。 5．抑制幽門螺旋桿菌試驗 幽門螺旋桿菌是消化性潰瘍病重要的致病因素之一。有條件也可以觀察藥物對該菌的抑制作用。,(三)陽性對照藥 陽性對照藥既可選西藥，也可以選用中藥。西藥的作用較明確，效果較肯定。常用有H2受體拮杭劑如西咪替丁、雷尼替丁、法莫替丁等；加強(qiáng)胃黏膜

13、防衛(wèi)功能的有生胃酮、硫糖等。中成藥品種較多，一般應(yīng)選擇療效較肯定的主治功能相似的中成藥作為對照藥，對照組應(yīng)是藥典記載的。對照藥劑量應(yīng)與受試藥的劑量相呼應(yīng)(等效量或給藥倍數(shù)相等)，以資比較。 三、消化性潰瘍動物模型建立方法 (一)慢性乙酸潰瘍模型 1．原理 在大鼠胃的漿膜下或漿膜面注射或浸潤定量的乙酸，由于乙酸的腐蝕致胃黏膜損傷而造成潰瘍。,2．方法 大鼠禁食24h，自由飲水，乙醚麻醉，常規(guī)消毒開腹，輕輕將胃取出，

14、在腺胃部前壁竇體交界處注入30％乙酸0．03ml于漿膜下，緩慢出針，勿使乙酸流出。用生理鹽水沖洗胃創(chuàng)面，將胃送入腹中，縫合腹壁創(chuàng)口。術(shù)后常規(guī)喂養(yǎng)，術(shù)后3～5日形成潰瘍。潰瘍—般呈圓形或卵圓形，但有不規(guī)則。一般術(shù)后的次日可分組進(jìn)行給藥治療。觀察完畢后，殺死動物，剖腹，結(jié)扎幽門及賁門，用甲醛溶液10ml注入胃內(nèi)，將胃放人同一濃度甲醛溶液中l(wèi)0min，使胃的內(nèi)外層固定以便測量。然后沿胃大彎將胃剪開，用自來水洗去胃內(nèi)容物，將胃鋪于紙上觀察，測量

15、潰瘍面積。通常以療后潰瘍面積(或體積)的大小評價藥物的作用。 3．注意點(diǎn) (1)技術(shù)操作過程應(yīng)嚴(yán)格消毒，籠具也應(yīng)消毒，以免術(shù)后感染影響藥物的觀察治療。 (2)注射的部位要求一致，酸的量要準(zhǔn)確，確認(rèn)乙酸注入漿膜下。發(fā)現(xiàn)有誤者應(yīng)棄去，以免影響結(jié)果。 (3)潰瘍的大小與注射乙酸量的大小有關(guān)。操作過程應(yīng)嚴(yán)格掌握，否則形成潰瘍差異較大。,(二)應(yīng)激性潰瘍模型 1. 原理 給動物(大鼠或小鼠)施加一定強(qiáng)度的

16、刺激因素(如束縛、冷凍、饑餓、創(chuàng)傷等)，可形成急性胃潰瘍，通常采用束縛水浸應(yīng)激法。 2．方法 取禁食24h大鼠，關(guān)進(jìn)特制的圓形鐵絲籠內(nèi)，浸入水中至劍突部位，水溫18~20C，7h后處死動物，打開腹腔，結(jié)扎賁門與幽門后將胃取出，由幽門向胃內(nèi)注入1％甲醛溶液10ml，將胃浸入同濃度甲醛溶液中10min，固定內(nèi)外層。沿胃大彎剪開胃，用自來水洗去胃內(nèi)物，平鋪白紙上。觀察脾胃部潰瘍發(fā)生的情況。潰瘍位于腺胃部，表現(xiàn)為點(diǎn)狀出血，并出現(xiàn)線狀或

17、直徑為l-2mm圓形表淺性潰瘍，潰瘍的程度以潰瘍指數(shù)表示，并計算潰瘍的發(fā)生率。潰瘍發(fā)生率：潰瘍發(fā)生的動物數(shù)占試驗動物數(shù)的百分比。 3．注意點(diǎn) (1)動物體重以160—180mg為宜，每批動物大小一致。禁食宜每只—籠，籠底應(yīng)不能積留糞便，以免動物自食。 (2)所用的應(yīng)激鐵籠大小與動物關(guān)進(jìn)后松緊度合適為準(zhǔn)，太松動物應(yīng)激時會在籠中上下移動或轉(zhuǎn)身溺水死亡。 (3)潰瘍程度與應(yīng)激強(qiáng)度有關(guān)，包括應(yīng)激時間、水溫、水浸部

18、位的高度等因素，故應(yīng)嚴(yán)格控制。,(三)利血平潰瘍模型 1．原理 利血平刺激5-HT和(或)組胺的釋放，引起過多的胃液分泌以及胃壁的血管運(yùn)動變化從而引起潰瘍。 2．方法 取體重160～180g大鼠，禁食24h，自由飲水，腹腔注射利血平5mg/kg(體重)，18h處死動物，取胃按上法用福爾馬林固定，沿胃大彎割開胃腔平鋪紙上，觀察潰瘍發(fā)生情況，潰瘍位于腺胃部，以條索狀和點(diǎn)狀為主。潰瘍指數(shù)的測量及計算與應(yīng)激性潰瘍模型相同。

19、 3．注意點(diǎn) 利血平的劑量不宜過大，否則動物容易死亡。給利血平后處死動物的時間應(yīng)視天氣情況而定，天氣太冷時相對縮短處死時間，12—15h為宜。該模型的穩(wěn)定性與動物體質(zhì)、禁食時間、利血平的量、室溫等同素有關(guān)，應(yīng)盡量控制實驗條件—致。,(四)幽門結(jié)扎法潰瘍模型 1．原理 通過手術(shù)結(jié)扎幽門，使胃內(nèi)胃酸、胃蛋白酶潴留，攻擊因素增強(qiáng)，造成對胃黏膜的侵蝕作用而形成潰瘍。 2．方法 大鼠禁食36h，自由飲水。在輕度乙醚麻醉

20、下，常規(guī)消毒開腹，在幽門與十二指腸連接處用縫線結(jié)扎，術(shù)后禁食禁水，18h后處死，按需要不同時間處死，取胃按前法用甲醛溶液固定，沿胃大彎剖開。觀察前胃部潰瘍發(fā)生情況，并同時分析胃液分泌情況。無穿孔者以小潰瘍數(shù)及潰瘍面積計算潰瘍指數(shù)。潰瘍的最大徑大于1mm者計算面積。 3．注意點(diǎn) (1)動物應(yīng)嚴(yán)格禁食，時間36~48h，單籠，籠底不能存留糞便，以免饑餓自食。因為胃內(nèi)容會影響潰瘍的形成，干擾結(jié)果。 (2)手術(shù)結(jié)扎小心避

21、開血管，以免影響胃血液循環(huán)。結(jié)扎時間的長短、室溫的高低直接影響潰瘍的形成；時間太短潰瘍輕微，太長易致穿孔死。室溫較低應(yīng)相應(yīng)縮短處死時間。 (3)觀察藥物對潰瘍的作用時，動物應(yīng)預(yù)先給藥，或同時給藥，若粗制劑采用灌胃給藥，應(yīng)確認(rèn)胃內(nèi)藥物已排空手術(shù)結(jié)扎。粗制劑在結(jié)扎的同時采用十二指腸注入給藥較好。,(五)吲哚美辛潰瘍模型 1．原理 美辛通過抑制胃黏膜前列腺素合成酶，使胃黏腆內(nèi)前列腺素減少，細(xì)胞保護(hù)作用減弱，以致胃黏膜防御因素

22、減弱而形成潰瘍。 2．方法 大鼠禁食24h，自由飲水，皮下注射吲哚美辛20mg／kg(體重)(吲哚美辛粉溶于5％碳酸氫鈉溶液中，成為10mg／ml，再用蒸餾水稀釋成2mg／ml。此溶液為等張，pH介于7．5—8．0)。7h后處死，取胃用甲醛溶液固定，沿胃大彎剖開胃腔，展開平鋪，觀察潰瘍情況并汁算潰瘍指數(shù)，潰瘍位腺胃部，表現(xiàn)為與軸平行的點(diǎn)狀、線狀瘀點(diǎn)。潰瘍指數(shù)的評定及計算與應(yīng)激性潰瘍模型相同。 3．注意點(diǎn) 該模型的損傷

23、程度與動物體質(zhì)、禁食時間、美辛的量、給吲哚美辛后的時間有關(guān)。觀察中藥的效應(yīng)一般應(yīng)預(yù)先給藥．給藥后30—60min給吲哚美辛。本法也可以采用阿司匹林或腹腔注射(150mg／kg)復(fù)制得到相似的潰瘍模型。,(六)無水乙醇、O．6mol／L鹽酸、O．2mol／L氫氧化鈉胃損傷模型 1．原理 給動物某些化學(xué)物質(zhì)如強(qiáng)酸(HCL)、強(qiáng)堿(NaOH)、無水乙醇。由于這些物質(zhì)直接損傷胃黏膜而形成潰瘍。 2．方法 大鼠禁食24h，自由

24、飲水，每只動物選擇下列物質(zhì)灌胃：0．6mol／l鹽酸、0．2mol／L氫氧化鈉、上水乙醇1．0ml。60min后處死動物，取胃用甲醛溶液固定，沿胃剖開胃腔，展開，觀察腺胃部潰瘍發(fā)生情況，并測潰瘍指數(shù)，潰瘍指數(shù)的評定方法同應(yīng)激性胃潰瘍模型。 3．注意點(diǎn) 此類潰瘍發(fā)病部位在腺胃部，以條索狀出血性缺損為特征。觀察中藥對模型的效應(yīng)時，如果采用灌胃給藥，需確認(rèn)中藥在胃中已排空。某中約對胃排空呈抑制作用。往往給藥后短時間(1—2h)難以排

25、空，這時如果給上述物質(zhì)造型，由于胃內(nèi)藥液的稀釋作用能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。,慢性萎縮性胃炎藥,,一、實驗設(shè)計的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ) 慢性萎縮性胃炎(簡稱CAG)是以胃黏膜固有腺體萎縮、黏膜變薄、黏膜肌層增厚、胃酸分泌減少，臨床上以上腹疼痛、脹滿、噯氣、納呆為主要表現(xiàn)的病變。屬中醫(yī)“胃脘痛”、“胃痞”的范疇。 有關(guān)慢性萎縮性胃炎的病因尚未完全清楚。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為其病因一般與環(huán)境、免疫、遺傳、年齡、膽汁返流、慢性乙醇中毒、慢性淺表性胃炎、幽門螺

26、旋菌感染等因素有關(guān)。中醫(yī)對本病病因的認(rèn)識，認(rèn)為主要與飲食不節(jié)、嗜好煙酒、進(jìn)食熱燙粗糙或刺激性食物、情志不節(jié)、惱怒郁結(jié)、素體虛弱、勞倦內(nèi)傷，或用藥不當(dāng)、久病體虛等因素有關(guān)。,在治療方面，日前，西醫(yī)治療仍缺乏特效藥物，對證治療為主，如消除病因，避免服用對胃有強(qiáng)刺激的食物和藥物，忌煙酒，注意飲食規(guī)律，積極治療淺表性胃炎及有關(guān)的感染病灶。治療的藥物主要有維酶素、肽胃泌素、弱酸、消膽胺、嗎丁啉、硫糖鋁、復(fù)方鉍制劑以及必要時手術(shù)治療等。 中

27、醫(yī)治療本病有一定的優(yōu)勢。治療方法主要有辨證論治、基礎(chǔ)方加減、專方以及中成藥。由于CAG的病因病機(jī)變化復(fù)雜以及各地學(xué)術(shù)上的差異，臨床辨證淪治也不一樣。國內(nèi)中醫(yī)CAG的分型多達(dá)30種，比較集中的證型有脾胃虛弱(或脾胃虛寒)、肝胃不和、脾胃濕熱、胃陰不足、胃絡(luò)瘀血、痰濁中阻、熱毒溫結(jié)。因此常采用健脾、疏肝理氣清熱化濕、養(yǎng)陰益胃、活血化瘀、溫中化痰、解毒消癰、清熱和胃等治療方法。鑒于臨床多表現(xiàn)虛中夾實，在臨證時多采用一法為主多法結(jié)合的治療方法。

28、在療效評價方面，一般以臨床癥狀、胃鏡檢查、病理活校綜合評定。由于各地標(biāo)準(zhǔn)不一致，療效評價存在—定的差異。,二、藥效學(xué)研究的實驗設(shè)計 (一)對萎縮性胃炎動物模型的防治作用試驗 1．常用的動物模型 有關(guān)CAG的動物模型，有文獻(xiàn)報道，近年也偶見有關(guān)CAG藥效觀察的報告，但由于研究者的研究目的和出發(fā)點(diǎn)不同，在模型的制備方法、評價指標(biāo)也存在一定的差異。如何復(fù)制出與人類臨床病理特征相似的、方法可靠、重復(fù)性好的、適合藥效學(xué)試驗的模型仍在探索

29、之中。綜合國內(nèi)外近年文獻(xiàn)的報告主要有如下幾種造模方法： (1)去氧膽酸法：給大鼠或小鼠飲用一定濃度的去氧膽酸鈉，時間90日。 (2)主動免疫加去氧膽酸鈉法：大鼠皮下注射佐劑抗原(同種大鼠胃黏膜的生理鹽水的組織勻漿與福氏劑以1：l配成的乳劑)，加去氧膽酸鈉溶液飲用。 (3)綜合法：大鼠灌胃膽汁、50C熱水、主動免疫2次，時間70日。 (4)氨水法：給大鼠飲用o．02％濃度氨水90日。 (5)牛黃膽酸

30、法：給大鼠飲用一定濃度的牛黃膽酸鈉6個月。 (6)MNNG法：在飲水加入致痼劑MNNG給大鼠飲用60日。 (7)Y線照射法：采用Co多次小劑量照射大鼠。,2．觀察指標(biāo) (1)組織病理學(xué)：病理學(xué)的改變應(yīng)是反映新藥療效和評價藥效的最主要指標(biāo)。由于CAG是以胃黏膜固有腺體萎縮和固有層炎細(xì)胞浸潤為病理特征，并作為診斷依據(jù)，藥效的評價也應(yīng)體現(xiàn)這方面。動物模型之造模方法的不同，形成CAG的病理改變程度有所不同，評價指標(biāo)也有所

31、側(cè)重，觀察指標(biāo)常包括胃黏膜厚度、黏膜肌厚度、腺體數(shù)量、主壁細(xì)胞數(shù)、炎性細(xì)胞計數(shù)以及腸化發(fā)生率等。應(yīng)該指出的是，目前在動物模型的組織病理學(xué)指標(biāo)尚未有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，評價指標(biāo)仍以定性為主。如何使組織病理學(xué)的指標(biāo)更加科學(xué)可靠，仍應(yīng)努力探討，研究指標(biāo)的定量化評價是發(fā)展的趨勢，研究者應(yīng)盡可能采用先進(jìn)的檢測方法或嚴(yán)密的科研設(shè)計，使研究指標(biāo)科學(xué)可靠。 (2)生理病理指標(biāo)：CAG在胃黏膜發(fā)生形態(tài)病理改變的同時，其功能也伴隨改變，如胃固有腺體減少，主、

32、壁細(xì)胞也相應(yīng)減少，以致胃酸、胃蛋白酶的分泌也減少，胃黏膜的血管遭破壞而導(dǎo)致胃黏膜流量減少；胃黏腆屏障破壞而導(dǎo)致胃黏腆電位差下降；在胃黏膜細(xì)胞動力學(xué)方面，萎縮性胃炎時，胃黏膜上皮成熟障礙，失去了對DNA合成的控制能力，表現(xiàn)為DNA合成活性增強(qiáng)，若某種治療有效，隨著組織病理學(xué)的改善其胃分泌功能，胃黏膜血流、胃黏膜屏障功能得以改善或恢復(fù)正常，因此，胃酸、胃黏膜血流量、黏腆電位、胃黏膜DNA含量的測定也可作為反映藥物的療效指標(biāo)。 (3)

33、其他指標(biāo)：膽汁返流是萎縮性胃炎的重要病因之一，螺旋桿菌(HP)感染也是CAG的致病因素之一，胃液膽汁酸鹽和胃黏膜HP的檢測也可作為評價藥效的輔助指標(biāo)之—。,3．方法學(xué)評價 CAG動物模型的制備，就方法學(xué)而言其共同點(diǎn)之一是胃黏膜進(jìn)行慢性刺激。由于刺激的因素和強(qiáng)度不一樣，CAG形成的時間和程度也有差別。一般單因素，如單純占氧膽酸鈉飲用，時間相對較長，胃黏腆萎縮程度也相對輕一些。由于CAG的形成是一個緩慢的過程，病因是多方面的，田

34、此在動物模型制備方法上采用綜合因素，取得較好效果，口前就CAG動物模型的制備來說仍以綜合法較為理想。一是其形成過程與人類相似，多由淺表性炎癥發(fā)展到萎縮性胃炎的過程，二是其組織病理特征與人類相似，三是CAG形成，短期內(nèi)不易恢復(fù)，適合藥效觀察。由于CAG存在輕重程度之分，同是治療CAG的藥物，其適應(yīng)證從作用強(qiáng)度有所不同，研究者可根據(jù)藥物的作用特點(diǎn)及條件，選擇合適的造模方法。,(二)其他試驗 1. 抗炎試驗 胃黏膜的慢性炎癥反應(yīng)是

35、CAG的病理特征之一，消除或減輕炎癥是臨床治療目的之一。除在CAG模型評價藥物的作用外，也可采用一般的非特異性炎癥模型觀察藥物的抗炎效果，如棉球肉芽腫炎癥模型、免疫性關(guān)節(jié)腫模型等。 2．止痛試驗 疼是CAG臨床癥狀之一，具有止痛作用的藥物有利改善CAG的臨床癥狀。觀察藥物的止痛效果，也叫作為評價藥效的輔助指標(biāo)，通常采用醋酸扭體法試驗、熱板法、離體腸管解痙試驗等。 (三)陽性對照藥 由于對CAG的治療尚缺少特效藥

36、物，故理想的陽性藥難以找到。國內(nèi)在西藥多選擇維酶索作為對照藥。作為中藥新藥研究，能選擇功能相似的中藥則較為理想，但必須是療效比較肯定的，而且藥效試驗證明是有效的。鑒于目前市場療效肯定的中藥不多，研究者在選擇時應(yīng)加以注意，以保證陽性藥質(zhì)量。,三、動物模型的建立方法 (一)綜合法復(fù)制CAG大鼠模型 1．原理 采用復(fù)合刺激因素，膽汁或主要成分(去氧膽酸鈉)、熱水、免疫損傷等對胃黏膜進(jìn)行較長時間的刺激，造成胃黏膜慢性損傷，胃黏

37、膜的營養(yǎng)代謝障礙，以致胃黏膜萎縮變薄、固有腺體減少、炎性細(xì)胞浸潤、結(jié)締組織增生而形成CAG。 2 . 方法 采用主動免疫2次，同時膽汁及熱水灌胃連續(xù)70日。 (1) 主動免疫：每只大鼠皮下注射佐劑抗原(同種大鼠胃黏膜的生理鹽水的組織勻漿與福氏佐劑以1：1配成的乳劑)0．3ml，1個月后重復(fù)注射1次。 (2)膽汁灌胃：進(jìn)行第一次免疫的同時，采用無化膿性炎癥病人的引流膽汁，按12．5ml／kg(體重)給大鼠灌胃(

38、灌目前4h停食、自由飲水)，每日1次，連續(xù)70日。 (3)熱水灌胃：在灌胃膽汁的同日(與灌膽汁間隔5h)灌胃50℃熱水12．5ml／kg(體重)，每日1次，連續(xù)70日。,3．模型考核 造模結(jié)束，隨機(jī)取少數(shù)動物進(jìn)行生理病理、組織病理學(xué)指標(biāo)檢測，確認(rèn)模型成功后才能進(jìn)行藥物療效觀察。 (1)生理病理學(xué)指標(biāo)：胃黏膜pH(微玻璃pH電極直接測定)、胃黏膜血流量、胃黏膜電位差。 (2)組織病理學(xué)：固定部位取，通常在胃小彎及

39、前后壁，常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色、光鏡下觀察胃竇、胃體變化。此法造模大鼠的病理學(xué)改變?yōu)椋何葛つぷ儽?，胃固有腺體減少，黏膜肌層增厚；胃黏腆pH升高，胃黏膜血流量、胃黏膜電位差下降。 4．藥物療效觀察 造模結(jié)束，確認(rèn)CAG成功后，將動物隨機(jī)分組進(jìn)行給藥觀察，治療時間通常45~60日，治療結(jié)束進(jìn)行上述組織病理學(xué)，病理生理學(xué)指標(biāo)檢測，綜合評價藥物的療效。 5．注意點(diǎn) 此法是采用多同素造模，每日須2次給大鼠灌胃，時間較長，

40、要求操作者技術(shù)要熟練，否則易誤傷食管、胃部或誤入氣管引起吸入性肺炎，造成不必要的動物死亡。動物的飼養(yǎng)、衛(wèi)生條件都進(jìn)行嚴(yán)格控制．確保模型成功的同時，不受其他疾病的干擾。,(二)綜合法復(fù)制CAG大鼠模型 1．原理 采用去氧膽酸鈉、熱糊灌胃和免疫損傷的方法造成胃黏膜慢性損傷，以致胃黏膜營養(yǎng)代謝障礙，最后形成CAG。 2 方法 與前法不同的是，本法以去氧膽酸鈉飼養(yǎng)代替人的膽汁灌胃，并以熱糊灌胃主動免疫的方法。 (1

41、)去氧膽酸鈉飼養(yǎng)：0．2％去氧膽酸鈉作為飲料給大鼠飲用，連續(xù)90日。 (2)主動免疫：造模的第一星期和第五星期，每只大鼠皮下注射佐劑抗原(同種大鼠胃黏膜的生理鹽水組織勻漿與福氏佐劑以1：1成的乳劑)0．3ml。 (3)熱糊灌胃：每隔1日灌胃熱糊(55℃)10ml／kg(體重)，連續(xù)90日。,3．模型考核 造模結(jié)束，隨機(jī)抽取少量動物進(jìn)行組織病理學(xué)檢測和胃酸、胃蛋酶測定。 (1)胃酸、胃蛋酶的測定：造模結(jié)束處死少數(shù)

42、動物，摘胃，沿胃大彎剪開，用5ml蒸餾水浸洗胃黏膜3次，3000r／min離心10min，吸清液1ml測定胃蛋白酶活性(酪氨酸法)，其余采用酸堿中和法滴定胃液的酸度。 (2)組織病理學(xué)：沿胃小彎自前胃至幽門取全層胃壁一塊，用10％甲醛溶液固定，常規(guī)包埋切片，HE染色，作光鏡檢查。 (3)炎癥指標(biāo)：炎癥程度分四級(1—4級)：“1”無炎癥；“2”在胃黏膜表層或底部有少量散在的炎細(xì)胞；“3”在胃黏膜部分均有較多的炎細(xì)胞；“4

43、”在黏膜內(nèi)聚集成堆的炎細(xì)胞浸潤。在低倍鏡觀察全層胃黏膜，每一切片取10個視野：竇部4個，竇體交界處1個，體部4個，前胃與腺胃交界處1個。根據(jù)每個視野的炎癥分級數(shù)，按竇部、竇體交界、體部、前胃與腺胃交界處等四個部位，分別取具均值進(jìn)行比較。 此法造模動物胃黏膜病理學(xué)改變以胃竇部及胃體部改變明顯，表現(xiàn)為胃黏膜變薄、黏膜肌增厚、炎性細(xì)胞浸潤，胃的泌酸功能下降。,(三)MNNG法復(fù)制CAG大鼠模型 1 . 原理 MNNG為一種致

44、癌劑，在誘發(fā)胃痛過程中，胃黏膜屏障受到破壞，早期胃黏膜經(jīng)歷從糜爛、萎縮、化生過程，符合人類CAG的病理變化。 2．方法 雄性Wistar大鼠，體重180-200g，常規(guī)顆粒鼠料喂養(yǎng)。在飲水中加入MNNG作為飲用液。方法是：每星期先用蒸餾水配成1g／L濃度的儲存液，避光冷藏保存，同時用蒸餾水將其配成含MNNGl67ug／ml的飲用液，裝入200ml的飲水瓶，外涂黑色，每日更換，大鼠盡量飲用，連續(xù)2個月。 3．病理檢查

45、造模結(jié)束，斷頭處死動物．迅速取胃，沿胃大彎剖開，攤平，用生理鹽水沖洗放入10％甲醛液固定，然后沿前壁、小彎和后壁自幽門至前胃剪取一條2cmx0.3cm病理材料，經(jīng)常規(guī)包埋，切片、染色，光鏡觀察病理變化情況。,4 病理改變 本法造模動物病變以腺胃小彎、前壁受累較明顯，病變不僅見于幽門區(qū)，遍及胃體各處。服用MNNG2個月，大鼠胃黏膜出現(xiàn)不同程度萎縮和修復(fù)增生，并有炎細(xì)胞浸潤，2／3動物黏膜糜爛，個別動物糜爛同時見于幽門、胃體多處。

46、 模型病理改變程度與服用MNNG時間的有關(guān)。大鼠飲用MNNG 1星期時，胃黏膜表皮及小凹局部遭到破壞，上皮剝脫，形成淺表糜爛，固有腺體尚完好，黏膜剛有層及黏膜下層充血，有炎細(xì)胞浸潤，兩星期時，黏膜糜爛加深，表面覆有炎性滲出物或結(jié)痂，腺體出現(xiàn)萎縮。位于胃體的黏膜固有腺體壁細(xì)胞和主細(xì)胞染色特征消失，部分腺體出現(xiàn)修復(fù)性增生，腺體數(shù)增多，排列較密，上皮呈方形，胞漿嗜堿，核大而深染，核分裂常見，但無異型。1個月時，黏膜萎縮和修復(fù)性再生都進(jìn)一步加

47、重，至2個月幾乎難見到正常黏膜固有腺體，而為再生腺體取代。,(四)氨水法復(fù)制CAG大鼠模型 1．原理 氨水是—種胃黏膜屏障的破壞劑。低濃度的氨水給大鼠長時間飲用，造成對胃黏膜的慢性刺激，從而引起胃黏膜屏障及胃黏膜防御功能的破壞，胃黏膜營養(yǎng)代謝障礙，導(dǎo)致胃黏膜萎縮。 2．方法 選用Wistar雄性大鼠，200～220g，以0．02％氨水作為飲料給大鼠飲用，同時每隔7 日給大鼠灌胃l％氨水(10ml／kg)1次，連續(xù)90

48、日。造模結(jié)束進(jìn)行胃黏膜組織學(xué)檢查。 3．注意點(diǎn) 大鼠以成年雄性大鼠為好，幼齡大鼠胃黏膜修復(fù)能力強(qiáng)，同法造模，其胃黏膜萎縮的程度輕于成年鼠。氨水宜隔日新鮮配制，所用氨水要新鮮。,便 秘 藥,,一、實驗設(shè)計的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ) 便秘指糞便在結(jié)腸停留時間太久，水分含量降低，變干變硬，以至不易排出。分類有功能性便秘(或稱原發(fā)性便秘)、器質(zhì)性便秘(或稱繼發(fā)性便秘)、弛緩性便秘和痙攣性便秘。便秘的病因較復(fù)雜，常見的有胃腸道內(nèi)容物運(yùn)動速度減

49、慢，胃腸道梗阻，結(jié)腸應(yīng)激性減退，腸道肌張力減低或痙攣，精神過度緊張或抑郁等。 中醫(yī)認(rèn)為本病發(fā)病的原因，有燥熱內(nèi)結(jié)，津液不足，情志失和，氣機(jī)郁滯，勞倦內(nèi)傷，身體虛弱，氣血不足等。辨證可分熱秘、氣秘、虛秘和冷秘四類。 繼發(fā)性便秘應(yīng)以治療原發(fā)性疾病為主，中醫(yī)藥主要適用于原發(fā)性便秘的治療。治療目的為通利大便，排除腸道內(nèi)宿食積滯。,二、藥效學(xué)研究的實驗設(shè)計 (一)對便秘模型的防治作用試驗 1．常用便秘動物模型

50、 (1)失水便秘模型：采用失水小鼠模擬津傷、腸燥之便秘。 (2)地芬諾酯模型：為非特異性便秘模型。 (3)實驗型便秘模型：為糞性腹膜炎模型，模擬實熱壅滯之便秘。 2．觀察指標(biāo) (1)第一次排黑便時間。 (2)排便的粒數(shù)(或點(diǎn)數(shù))、重量、性狀。 3．方法學(xué)評價 燥結(jié)便秘模型為通過禁水不禁食使小鼠由失水引起腸水分缺少，大便于燥不易排出而出現(xiàn)便秘。地芬諾酯模型是紿止瀉藥地芬諾酯，增加腸張力，

51、抑制腸蠕動和腸節(jié)段性收縮，使腸的內(nèi)容物通過延遲，腸內(nèi)水分吸收增加，引起大便秘結(jié)。兩種模型基本都屬于腸燥便秘，但造模方法不同，便秘發(fā)生的機(jī)制也有差異，實驗時兩個模型互相補(bǔ)充，對藥效的反映更加全面。,(二)相關(guān)藥效學(xué)試驗和機(jī)理研究 1．對正常小鼠排便的影響 觀察指標(biāo)與便秘模型相同，可反映受試藥物對在正常狀態(tài)下動物的藥理作用。 2．腸內(nèi)容物推進(jìn)速度試驗 排便活動與腸的推進(jìn)運(yùn)動有關(guān)，腸推進(jìn)運(yùn)動減緩時，糞便在腸管滯留時間延長，

52、利于水分吸收，引起便秘。炭末椎進(jìn)試驗方法以炭末為標(biāo)志，灌胃后在規(guī)定時間內(nèi)處死動物，取出胃腸，測量炭末頭端在腸內(nèi)推進(jìn)的距離，作為觀察小腸推進(jìn)性運(yùn)動的定量指標(biāo)。試驗可觀察藥物對正常小腸推進(jìn)運(yùn)動的影響，也可以觀察藥物拮抗腎上腺素負(fù)荷致推進(jìn)減緩和阿托品(或嗎啡)所致小鼠小腸推進(jìn)減慢的作用。炭末排出時間測定方法同樣以炭末灌胃后，觀察糞便首次出現(xiàn)黑色炭末的時間，評價試藥對小腸和大腸推進(jìn)運(yùn)動的影響。此外還有用酚紅作為標(biāo)志物定量測定胃排中和腸道推進(jìn)運(yùn)動

53、，以及采用盲腸插管注入炭末混懸液測定大腸推進(jìn)運(yùn)動等方法，均可參考。 3. 對腸容積的影響 腸容積增大，可擴(kuò)張腸管，促進(jìn)排便運(yùn)動，本項試驗多用寸；藥物升高腸腔滲透壓，增大腸容積的藥理作用。,4．腸管平滑肌試驗 腸道運(yùn)動主要是平滑肌的收縮和舒張，結(jié)合腸推進(jìn)實驗，可分析通便藥對腸管運(yùn)動的作用部位和機(jī)制，通常有離體或在體腸運(yùn)動試驗方法，離體腸法常采用豚鼠、大鼠或家兔的離體腸為材料，在體試驗多用家兔、犬等較大動物。腸實驗與腸推進(jìn)實驗

54、也一樣，對觀察成藥對正常腸管運(yùn)動的影響外，還可采用腎上腺素、阿托品或乙酰膽堿負(fù)荷的方法，觀察試藥對藥物引起的腸管運(yùn)動抑制或興奮的拮抗作用。 (三)陽性對照藥的選擇 首選功能、主治、制劑相似的有生產(chǎn)批文的中成藥，目前通便中成藥制劑較多，如麻仁丸(北京同仁堂)、便秘通(廣州中藥—廠)等，可供選用。西藥有硫酸鎂、液狀石蠟等，直腸用藥有甘油栓、開塞露等，但一般治療便秘中藥藥效學(xué)實驗很少作為陽性對照藥選用。,三、動物模型建

55、立方法 (一)失水便秘模型 1．原理 禁水后引起小鼠體液減少，模擬中醫(yī)的傷津、腸燥便秘。 2．方法 取健康小鼠，禁水不禁食，用大米喂養(yǎng)7日。小鼠外觀瘦小，尿色深黃，體重下降，大便結(jié)成圓珠狀。實驗前禁食禁水12h，給藥溶液及水中加入2％墨汁。給藥后小鼠置鋪有吸收紙的鐘罩內(nèi)連續(xù)觀察4h，記錄小鼠第一次排便時間，糞便粒數(shù)及稱量干糞重量，比較各組動物上述各項指標(biāo)的差異。 3．注意點(diǎn) ①動物可選用老年大鼠更易

56、成功；②造模禁水不禁食時間有采用3日時間的，可根據(jù)各試驗室經(jīng)驗選擇；③給藥時間也有于禁水72h后進(jìn)行的，同樣根據(jù)經(jīng)驗選擇；④給藥組給藥液，對照組給等量蒸餾水。,(二)地芬諾酯模型 1．原理 地芬諾酯系呱替啶的衍生物，為人工合成，能加強(qiáng)腸張力，抑制腸蠕動，增加腸的節(jié)段性收縮，使腸的內(nèi)存物通過延遲，從而使腸內(nèi)水分吸收增加，動物造模即利用地芬諾酯這些藥理作用，灌胃給予地芬諾酯，使小鼠腸道水分吸收增加而引起腸燥便秘。 2，方法

57、 小鼠禁食不禁水12h后，灌胃給復(fù)方地芬諾酯，劑量50mg／kg， 然后觀察給藥后12h內(nèi)小鼠的干糞點(diǎn)數(shù)、稀糞點(diǎn)數(shù)及不排便的動物數(shù)。 3．注意點(diǎn) 地芬諾酯的劑量可根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果適當(dāng)調(diào)整，以給藥后小鼠無稀糞，干糞點(diǎn)數(shù)少于正常對照組，70％以上有部分不排便為參考標(biāo)準(zhǔn)。,(三)實熱型便秘模型 1．原理 本模型模擬急性細(xì)菌性腹膜炎，該病在臨床上可出現(xiàn)陽明腑實證，痞、滿、燥、實、堅，需用寒下法通里攻下治之。 2．方

58、法 取小鼠自家糞少許，磨碎，加生理鹽水適量，制成自家糞混懸液?？s小鼠腹腔注射自家糞混懸液0．5ml。l8h后，可見動物豎毛、少動，蜷曲蹲伏、不進(jìn)食。解剖腹內(nèi)有少量混濁液體，腸管充血，表面有纖維素性沉積物附著，多數(shù)腸管充氣膨脹，部分腸管痙攣。,泄 瀉 藥,,一、實驗設(shè)計的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ) 泄瀉是指排便次數(shù)、便量和水量比平時增加，糞便稀溏，井可有未消化的食物、黏液、膿血及脫落的腸黏膜等。滲出性腹瀉可由腸道炎癥、潰瘍、腫瘤浸潤等引起；滲

59、透性腹瀉常見原因為消化不良，吸收不良和腸系膜淋巴管梗阻；分泌性腹瀉則與細(xì)菌感染或內(nèi)分泌腫瘤有關(guān)。此外腸易激綜合征、甲狀腺功能亢進(jìn)等引起腸道運(yùn)動功能紊孔，是常見病因之一。 對泄瀉應(yīng)首先引對不同病因分別給予治療，例如腸道感染給抗菌藥，腫瘤則應(yīng)手術(shù)切除等抗腫瘤治療。止瀉藥只是針對泄原發(fā)病因的治療后考慮使用。西藥一般分為四類：①阿片及其衍生物制劑，通過抑制腸管運(yùn)動而止瀉；②吸附劑，通過表面吸咐作用吸附水、氣、細(xì)菌、毒物而起止瀉作用；③收

60、斂劑，能凝固蛋白質(zhì)形成層而使腸道免受有害因子刺激，減少分泌；④保護(hù)劑，能在胃腸道黏膜創(chuàng)面形成一層保護(hù)膜，使之不受刺激而減輕腹瀉。 中醫(yī)隊為泄瀉的主要病變在脾胃與大小腸，病因與感受外邪、飲食所傷、情知失調(diào)及脾胃虛弱或腎陽虛衰有關(guān)，其主要病因病機(jī)在于脾胃功能障礙。辨征分為溫?zé)?、食滯、肝胃不和、脾胃虛弱及腎陽虛衰等類型。治法有散寒化濕、清熱利濕、消食導(dǎo)滯、調(diào)和肝脾、健脾和胃、溫腎固澀等。,二、藥效學(xué)研究的實驗設(shè)計 (一)對瀉下

61、動物病理模型的治療作用試驗 1．常用藥物致瀉動物模型 通過灌胃給蓖麻油、番瀉葉或大黃等瀉下藥刺激腸道引起泄瀉。 2 觀察指標(biāo) 糞便總粒數(shù)、重量或同時記錄排濕糞動物數(shù)等。 3 方法學(xué)評價 造模方法簡便易行，能較準(zhǔn)確反映受試藥物的止瀉作用。某些對腸道運(yùn)動無明顯影響的受試藥，更適采用本法觀察止瀉作用。 (二)陽性對照藥 止瀉試驗的陽性對照藥選現(xiàn)有中成藥或西藥，但止瀉西藥的作用較肯定，如復(fù)方地芬

62、諾酯、鹽酸洛哌丁胺、次碳酸鉍等。中藥可選用腹可安等，療效也較滿意。,三、動物模型的建立方法 1．原理 蓖麻油、大黃、番瀉均屬刺激性瀉藥，給藥后能刺激動物的腸黏膜，增加腸蠕動，促進(jìn)排便。小醫(yī)認(rèn)為大黃、番瀉葉性味苦寒，歸大腸經(jīng)，能致瀉，因此所造模近似中醫(yī)的“脾虛瀉”、“寒瀉”。 2．方法 番瀉葉制劑的制備：取干燥葉片，研成細(xì)末(葉脈棄去不用)，先用沸蒸餾水研和，再加冷蒸餾水配制成8％的混懸液備用。大黃制劑的制備：取生大黃

63、l00g，砸碎，以水浸泡24h，過濾，40℃水濟(jì)濃縮至lg/ml。造模時取體重20k的純種健康小鼠，一般先給預(yù)試藥，然后以8％的番瀉葉粉混懸液灌胃，也可以用大黃水浸液，蓖麻油代替灌胃造模，小鼠放在濾紙(也可用淺色吸水紙)上，以濕糞多少表示腹瀉的程度，也可分別記錄正常便、軟便(便形不零散)、爛便(便形中間崩散)和瀉下便：觀察給番瀉葉(或大黃、蓖麻油)后1-6h，每小時換紙1次，7-24h后計數(shù)。,3．注意點(diǎn) (1)小鼠必須分籠(或

64、分格)單獨(dú)飼養(yǎng)觀察，籠底網(wǎng)眼適當(dāng)稍大，以便濕糞可隨時掉至籠下?；蛴么蟛Ａ┒氛肿⌒∈螅子谟^察，可避免糞便沾在籠網(wǎng)。 (2)試驗前應(yīng)先將小鼠分籠飼養(yǎng)，觀察1—2日，有泄瀉(濕糞)的動物不應(yīng)選取進(jìn)行實驗。 (3)造模前先給受試藥物，劑量和療程根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果制定。 (4)由于藥材來源，質(zhì)量等關(guān)系，大黃、番瀉葉的提取方法、劑量也可根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果適當(dāng)調(diào)整。 (5)濕糞的識別，指近似圓形的糊狀軟糞或稀糞，在濾紙上，其周圍

65、有棕色環(huán)帶，而正常的干糞則呈餅棍形或梭形，在濾紙上，其周圍不顯顏色。 (6)給瀉下藥后，1—6h，每小時換濾紙1次，必要時可縮短換紙時間，如不及時換紙，容易造成糞重疊，影響計數(shù)，6h后，濕糞減少，可少換或不換紙。 (7)評價試藥的止瀉作用，計算和比較各組小鼠24h濕糞總數(shù)。也可比較排濕糞的動物數(shù)，或比較各組不同糞便性質(zhì)的數(shù)，根據(jù)試驗具體情況考慮。,肝纖維化、肝硬化藥,,一、實驗設(shè)計的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ) 肝纖維化、肝硬化是一種或多

66、種病因長期或反復(fù)作用引起的慢性進(jìn)行性彌漫性肝臟損害的—種疾病。在我國本病發(fā)病的主要病因是病毒性肝炎、血吸蟲病、乙醇中毒、毒物和藥物、膽汁淤積、循環(huán)障礙和代謝紊亂等。一是可引起脂肪積蓄形成脂肪肝，二是肝細(xì)胞受到反復(fù)而廣泛的損害，肝細(xì)胞變性、壞死，繼而由肝細(xì)胞的再生和纖維組織增生，使肝臟組織結(jié)構(gòu)破壞，質(zhì)地變硬，發(fā)生硬化。 根據(jù)肝硬化的臨床表現(xiàn)特點(diǎn)，屬中醫(yī)的”臌脹”、“黃疸”、”脅痛”、“積聚”等病證，形成肝硬化的病機(jī)，早期是肝脾的功能失

67、調(diào)。先是肝氣失條達(dá)，郁結(jié)日久，脾失健運(yùn)，濕濁不化，進(jìn)一步阻滯氣機(jī)，脾虛及氣機(jī)阻滯，使瘀血蘊(yùn)里，絡(luò)脈壅塞，日久則成痞呋。瘀結(jié)日久，肝脾進(jìn)一步受損，水濕停聚并波及了腎。因此氣滯、血瘀、水停是肝硬化的三個重要病理變化。中醫(yī)早期治療多疏通肝氣，兼顧補(bǔ)脾運(yùn)濕，中期化瘀、行氣，補(bǔ)脾并養(yǎng)血柔肝，晚期化瘀逐水，健脾益腎。西醫(yī)則注重休息，高熱量高蛋白飲食，此外藥物的治療是補(bǔ)充維生素c、E及B族，保肝用肝太樂、維內(nèi)肝等。青霉胺被認(rèn)為有纖維化作用，免疫功能調(diào)

68、節(jié)劑可調(diào)整機(jī)體免疫功能，因此臨床均可使用，、但需注意青霉胺副反應(yīng)較多，其他藥物療效不夠穩(wěn)定，故防治脂肪肝、肝纖維化、肝硬化的藥物尚需進(jìn)一步開發(fā)。,二、藥效學(xué)研究的實驗設(shè)計 (一)對疾病動物模型的防治作用試驗 1，常用動物模型 (1)乙硫氨酸模型：乙硫氨酸有左旋、右旋及消旋光學(xué)異構(gòu)體，乙硫氨酸可引起肝臟脂肪變性。由于化學(xué)結(jié)構(gòu)與硫氨酸相似．后者為體內(nèi)甲基轉(zhuǎn)換的供體，乙硫氨酸與之競爭，取代甲基而提供乙基，使肝臟蛋白質(zhì)合

69、成發(fā)生障礙，使生成的RNA和蛋白質(zhì)含有乙基而非甲基，由于蛋白質(zhì)合成障礙，導(dǎo)致三酰甘油(甘油三酯)蓄積于肝臟，引起脂肪肝，長期給藥可形成肝硬化或肝痼，此模型操作簡便，成功率高，適合抗脂肪肝藥物篩選。 (2)營養(yǎng)不良、乙醇、四氯化碳復(fù)合因素肝硬化模型：采用兩種方法造成營養(yǎng)不良性肝硬化，一是給予高脂肪、低蛋白質(zhì)、低膽堿飲食，使肝肌發(fā)生脂肪變性，逐漸形成肝硬化，二是食物缺乏營養(yǎng)物質(zhì)，如胱氨酸、蛋氨酸、維生素K等，引起肝細(xì)胞壞死，發(fā)展為肝