對(duì)心肌缺血再灌注心律失常起保護(hù)作用藥物的藥理設(shè)計(jì)試驗(yàn)

1、對(duì)心肌缺血再灌注心律失常起保護(hù)作用藥物的藥理設(shè)計(jì)試驗(yàn),演示目錄,背景知識(shí)試驗(yàn)原理試驗(yàn)方法試驗(yàn)材料試驗(yàn)步驟數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果預(yù)測(cè)討論,背景知識(shí),缺血性心臟病和急性心肌梗死已成為當(dāng)今威脅人類健康的兩大主要?dú)⑹郑募∪毖獡p傷和心肌缺血再灌注損傷是導(dǎo)致這兩大病的主要病因。缺血性心臟病是由于血液供應(yīng)中斷一定時(shí)間后（一般30min)就會(huì)出現(xiàn)心肌細(xì)胞酸中毒，細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)改變和功能障礙，導(dǎo)致不可逆性損傷甚至死亡，也稱為缺血損傷。,背景

2、知識(shí),急性心肌梗死是由于血液供應(yīng)中斷一定時(shí)間后（一般30min)，為恢復(fù)心肌功能及時(shí)提供血液，由于在閉塞的冠動(dòng)脈再通，缺血區(qū)血運(yùn)重建后的一段時(shí)間內(nèi)，可發(fā)生血壓聚降，導(dǎo)致新功能不全，出現(xiàn)心律失常、猝死等病情惡化現(xiàn)象，也稱為缺血再灌注損傷。,試驗(yàn)原理,氧自由基(ORG)是心肌細(xì)胞呼吸產(chǎn)能過成中的副產(chǎn)物，包括超氧過離子，羥自由基和過氧化氫等。OFR可引起脂質(zhì)的過氧化，降低細(xì)胞膜流動(dòng)性，增加它的通透性，損傷離子泵，引起細(xì)胞能量和離子穩(wěn)態(tài)異常，最

3、終導(dǎo)致肌細(xì)胞損傷甚至死亡。,試驗(yàn)原理,正常情況下，有機(jī)體存在的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px)等內(nèi)源性抗氧化防御系統(tǒng)可將OFR 及時(shí)清除掉，維持正常的功能。在缺氧情況下，OFR明顯下降而生成的潛能增強(qiáng)，當(dāng)在恢復(fù)供氧時(shí)，OFR劇增超過了抗防御系統(tǒng)的清除能力，導(dǎo)致肌細(xì)胞損傷甚至死亡。,試驗(yàn)方法,采用在大鼠開胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降肢30min后，松扎再灌注60造成的心臟缺血再灌注模型，以心電圖監(jiān)測(cè)心律失常情況，主要指標(biāo)

4、以心律出現(xiàn)失常的時(shí)間，持續(xù)時(shí)間及室性心動(dòng)過速（VT）、心室顫動(dòng)（VF）的發(fā)生率，ST段在不同再灌注時(shí)間的變化。并測(cè)定心肌組織SOD、GSH-PX、及MDA、Ca2+的含量變化。,試驗(yàn)材料,試驗(yàn)動(dòng)物：Wister大鼠60只，雄雌各半220~240g.試驗(yàn)儀器及用具：心電圖機(jī)、內(nèi)切式組織勻漿器、原子吸光光度計(jì)、恒流泵、手術(shù)臺(tái)及手術(shù)的相關(guān)器具、橡皮管和線。藥品與試劑：試藥復(fù)方五加刺注射液（CASI）、烏拉坦、生理鹽水、前列腺素E1、MDA

5、、SOD及GSH-PX測(cè)定試劑盒、鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液。,試驗(yàn)步驟,LD50的測(cè)定，取LD50的1/3為試樣的最大量。動(dòng)物分組：將選好的60只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、陽性前列腺素E1m ug/kg組和CASI A、 B、 Cmg/kg組（A=1/2B=1/2C），其中每組10只。心肌缺血再灌注模型的制備：給各組大鼠胸腔注射烏拉坦1g/kg進(jìn)行麻醉，監(jiān)測(cè)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖，分離氣管并插管，開胸后應(yīng)立即進(jìn)行人工呼吸機(jī)正壓呼吸（頻率54次/mi

6、n流量每100g體重2ml).,試驗(yàn)步驟,假手術(shù)組冠狀動(dòng)脈前降肢下穿線不結(jié)扎外，其余各組均結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降肢。結(jié)扎30min后，松解結(jié)扎線進(jìn)行再灌注，時(shí)間為60min.在松解的同時(shí)，各組均以恒流泵經(jīng)股靜脈勻速輸入藥物或生理鹽水。,試驗(yàn)步驟,心律失常率及ST波段變化測(cè)定：通過心電圖機(jī)，記錄再灌注30min內(nèi)心律失常出現(xiàn)的時(shí)間、持續(xù)時(shí)間及室性心動(dòng)過速（VT）、心室顫動(dòng)（VF）的發(fā)生率，并記錄15min、30min、60min的ST段時(shí)間變

7、化如表1和表2。,試驗(yàn)步驟,心肌組織勻漿的制備：再灌注60后，各組立即取出心臟，用冰冷生理鹽水沖洗、吸干稱重后以生理鹽水為介質(zhì)，用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制10%的心肌勻漿組織備用。,試驗(yàn)步驟,心肌組織生化指標(biāo)測(cè)定SOD、GSH-PX活力及MDA含量均按試劑盒方法測(cè)定計(jì)算，心肌細(xì)胞內(nèi)Ca含量以Ca標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，用原子吸光光度計(jì)測(cè)定,表3。,數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法,心律失常發(fā)生率用X²檢驗(yàn)、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，所得計(jì)量資料均以x

8、7;s表示表1，CASI對(duì)大鼠心肌缺血再灌注出現(xiàn)心律失常時(shí)間、持續(xù)時(shí)間及發(fā)生率（ x±s n=10),,,數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法,心律失常發(fā)生率用X2檢驗(yàn)、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間檢驗(yàn)，所得計(jì)量資料均以x±s表示表2，CASI對(duì)大鼠心肌缺血再灌注ST段抬高程度/mv（ x±s n=10),,數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法,心律失常發(fā)生率用X2檢驗(yàn)、其他數(shù)據(jù)進(jìn)行組間檢驗(yàn)，所得計(jì)量資料均以x±s表示表3，CASI對(duì)大鼠心肌缺血再灌

9、注MDA、 Ca2+的含量及 SOD、GSH-Px活性的影響（ x±s n=10),,,試驗(yàn)結(jié)果預(yù)測(cè),CASI對(duì)大鼠缺血再灌注心律失常發(fā)生率及出現(xiàn)時(shí)間、持續(xù)時(shí)間的影響：假手術(shù)組：未出現(xiàn)任何心律失?，F(xiàn)象；模型組：出現(xiàn)心律失常時(shí)間短，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，發(fā)生率最高；陽性藥物組和CASI組（A、B、C㎎/㎏）：出現(xiàn)心律失常時(shí)間延長(zhǎng)，持續(xù)時(shí)間明顯縮短，發(fā)生率明顯下降，與模型組比較有差異性顯著。,試驗(yàn)結(jié)果預(yù)測(cè),CASI對(duì)大鼠缺血再灌注15

10、min、30min、60min ST段變化的影響： 假手術(shù)組：無明顯改變； 模型組：顯著提高； 陽性藥物組和CASI組（A、B、C㎎/㎏）：應(yīng)明顯降低ST段的抬高程度，與模型組比較有顯著性差異。,試驗(yàn)結(jié)果預(yù)測(cè),CASI對(duì)大鼠缺血再灌注心肌組織中MAD、Ca2﹢含量及SOD、GSH-PX活性的影響：與假手術(shù)組相比，模型組的MAD、 Ca2﹢含量明顯增高，而SOD和GSH-PX活性明顯降低。陽性藥物組和CASI組（A