香菇多糖的提取純化方法

1、香菇多糖的提取純化方法呂紅常秀蓮（煙臺(tái)大學(xué)生命科學(xué)院，煙臺(tái)264005）摘要摘要：香菇多糖是香菇中分離出的一種重要的具有生理活性的物質(zhì)，具有抗病毒、抗腫瘤、增強(qiáng)人體免疫力等多種功能，在保健食品和藥品開發(fā)方面具有廣闊的應(yīng)用前景。概括介紹當(dāng)前常用的熱水浸提法、酶解法、微波提取法和深層發(fā)酵培養(yǎng)法等6種香菇多糖的提取方法。并簡(jiǎn)單比較香菇多糖提取的這幾種方法并介紹了超濾滲濾法和活性炭聯(lián)合陶瓷膜超濾法這兩種香菇多糖的純化方法。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：香菇多糖

2、提取純化抗癌抗病毒ExtractionpurificationofLentinanLvhongchangxiulian(YantaiuniversitylifeacademyofsciencesYantai26005)Abstract:Lentinanwasisolatedfrommushroomswithanimptantphysiologicalactivityofsubstanceswithantivirusanticancere

3、nhanceimmunityotherfunctions.Ithasbroadapplicationprospectsinhealthfooddrug’sdevelopment.Giveoverviewofthecurrentfmulationusedinhotwaterenzymaticmethodmicrowaveextractiondeepfermentationmethod6kindsofmushroompolysacidesm

4、ethodIntroducedtheUltrafiltrationfiltrationmethodtheActivatedcarbonceramicmembranejointultrafiltrationmethodofLentinanpurification.Keywds:MushroompolysacideSeparationcancerantiviral1引言香菇多糖(Lentinan)是一種β13葡聚糖是從擔(dān)子菌綱傘菌科真菌香菇

5、子實(shí)體中提取分離純化獲得的均一組分的多糖，能治療癌癥抗惡性腫瘤抗病毒抗感染提高人體免疫力等多種生理功能。目前國(guó)內(nèi)對(duì)香菇多糖的分離有了很大發(fā)展，主要采用的方法有傳統(tǒng)熱水提取法、酸提取法、堿提取法、這些方法都有其優(yōu)點(diǎn)，也有其難以克服的不足之處。與傳統(tǒng)方法相比微波輔助提取法具有設(shè)備簡(jiǎn)單，快速，高效，安全等特點(diǎn)。2香菇多糖的提取方法2.1熱水浸提法這是最早采用的一種傳統(tǒng)方法：香菇多糖溶于水，熱水浸提時(shí)，香菇組織細(xì)胞膨脹破裂，多糖成分浸出。熱水浸

6、提香菇多糖，浸提時(shí)的料液比、溫度、時(shí)間、pH、醇析時(shí)的乙醇添加倍數(shù)及提取次數(shù)是影響多糖得率的主要因素。對(duì)料液比而言，若加水太少，提取不徹底；加水太多，容易降低提取液的固形物含量，不利于以后的分離，且加重了工業(yè)生產(chǎn)中的后續(xù)工藝，一般為1：20左右。對(duì)溫度來(lái)說(shuō)，隨著提取溫度的升高，粗多糖得率逐漸升高，在80%一95%時(shí)達(dá)到高峰，再提高溫度時(shí)，粗多糖得率升高趨勢(shì)趨于平緩，考慮到高溫會(huì)破壞多糖的結(jié)構(gòu)，影響其生物活性，同時(shí)高溫提取對(duì)工業(yè)化生產(chǎn)的設(shè)

7、備要求更嚴(yán)格。所以，提取溫度一般以80℃一95℃為宜。隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，粗多糖得率逐漸增加，0.5h一3h之間趨勢(shì)明顯，繼續(xù)延長(zhǎng)提取時(shí)間，多糖得率加趨勢(shì)逐漸趨于平緩，一般浸提時(shí)間為8h一12h。熱水浸提時(shí)的pH為自然pH值，大約在68之間。而對(duì)醇析時(shí)提取液的乙醇濃度來(lái)說(shuō)，隨著其逐漸升高，多糖得率時(shí)細(xì)胞膜由于吸水或外環(huán)境因素的影響而破裂，多糖類物質(zhì)流出。一般情況下，用復(fù)合酶提取效果明顯高于單酶的提取，這是因?yàn)橄愎郊?xì)胞壁主要由蛋白質(zhì)、幾丁

8、質(zhì)和纖維素等構(gòu)成，很堅(jiān)固；使用纖維素酶，果膠酶和蛋白酶先后水解，共同作用于香菇的細(xì)胞壁，使其破裂，多糖易于從胞內(nèi)釋放，比單一酶作用提高了香菇多糖的得率。但是，若蛋白酶和纖維酶同時(shí)使用，由于各自的最適條件不同，不能達(dá)到最佳水解效果，同時(shí)蛋白酶對(duì)纖維素酶具有水解作用，所以有些文獻(xiàn)報(bào)道雙酶水解與用纖維素酶單酶水解相比，效果沒(méi)有明顯提高。劉寧和李健(3)纖維素酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶分別兩兩組合成復(fù)合酶，研究其提取效果，結(jié)果如表1：表1復(fù)合酶

9、提取香菇多糖復(fù)合酶纖維素酶木瓜蛋白酶纖維素酶中性蛋白酶木瓜蛋白酶纖維素酶中性蛋白酶纖維素酶多糖得率（%）12.907.029.466.34由此可知，木瓜蛋白酶的提取得率明顯高于纖維素酶和中性蛋白酶的得率，其中尤以纖維素酶木瓜蛋白酶處理效果最佳。木瓜蛋白酶也是目前所知道的一種十分適合香菇多糖提取的酶，這是因?yàn)樗刑厥饨Y(jié)構(gòu)：它是一種含疏基(SH)肽鏈內(nèi)切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有較廣泛的特異性，對(duì)動(dòng)植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有較強(qiáng)的水解

10、能力。因此，復(fù)合酶解法是一種較好的提取法，很有發(fā)展前景。在具體提取多糖時(shí)，應(yīng)注意不同酶的選擇及組合，同時(shí)結(jié)合相關(guān)環(huán)境條件，篩選制定出最佳提取方案。2.4微波法提取香菇多糖微波提取法是一種新型提取法，由于溶劑及細(xì)胞液吸收微波能，微波射線輻射于溶劑并透過(guò)細(xì)胞壁內(nèi)部時(shí)，細(xì)胞內(nèi)部溫度升高壓力增大，當(dāng)壓力超過(guò)細(xì)胞的承受能力時(shí)，細(xì)胞壁破裂，位于細(xì)胞內(nèi)部的多糖就從細(xì)胞中釋放出來(lái)[4]。在微波法提取多糖的實(shí)驗(yàn)中，影響多糖提取率的主要因素有：微波功率、提

11、取時(shí)間以及提取次數(shù)等。隨著微波功率的提高，加熱速度增大，分子運(yùn)動(dòng)速度加快，滲透、擴(kuò)散及溶解速度加快；同時(shí)，高功率的微波引起細(xì)胞內(nèi)部的結(jié)構(gòu)變化，加速香姑多糖由外層細(xì)胞轉(zhuǎn)移到溶液中。所以，隨著提取功率的升高香菇多糖的得率升高，當(dāng)功率超過(guò)40%時(shí)，多糖增加趨勢(shì)趨于平緩；當(dāng)功率達(dá)到60%左右時(shí)，多糖部分會(huì)被碳化。所以，微波功率一般為700W至900W。對(duì)微波作用時(shí)間而言，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，多糖得率先上升，而后又下降。這可能是因?yàn)槲⒉ㄝ椛鋾r(shí)間加長(zhǎng)，

12、香菇多糖慢慢分解，逐漸被氧化而造成多糖的損失。因此，微波作用時(shí)間也很重要，應(yīng)根據(jù)所用微波功率和處理的樣品量來(lái)決定適當(dāng)?shù)淖饔脮r(shí)間。而微波提取的次數(shù)也會(huì)對(duì)其產(chǎn)率有一定的影響。隨著次數(shù)的增多，多糖得率增加，但到了一定程度后，變化不大，考慮到提取次數(shù)增多，工藝操作復(fù)雜，水溶劑用量增加，過(guò)濾和濃縮困難，因此，提取次數(shù)不宜過(guò)多，通常為2至3次[5]。2.5超聲波提取法香菇多糖的超聲波(20KHz50MHz)提取—利用超聲波的空化作用分散破壞植物組織