雞內(nèi)金粘多糖提取純化的研究.pdf

1、粘多糖（Glycosaminoglyc，GAG）具有廣普抗癌作用，并在抗病毒、抗輻射、促進免疫、抗凝血等方面具有良好活性，可應(yīng)用于醫(yī)藥、化妝品等行業(yè)。
　　 目前粘多糖藥物開發(fā)制備主要集中于海洋可食用動物上，原料來源及品種有限，且價格相對昂貴，很大程度限制了粘多糖藥物的應(yīng)用。雞內(nèi)金又名里黃皮，其含有粘多糖，含量在10％左右。雞內(nèi)金若可作為粘多糖制備原料，來源豐富、價格低廉，粘多糖含量高，需要堿液提取工藝簡單。但是雞內(nèi)金一般當(dāng)作廢

2、物處理掉，將其作為粘多糖制備原料也可為廢物開發(fā)利用，且又提升家禽雞的經(jīng)濟價值。然而國內(nèi)外有關(guān)雞內(nèi)金粘多糖的提取分離尚未見任何報道，所以用雞內(nèi)金制備粘多糖有非常重要的研究價值。
　　 本文以雞內(nèi)金為原料，通過堿提取粘多糖，并通過Design-Expert6.0.5軟件進行響應(yīng)曲面設(shè)計和分析，建立雞內(nèi)金粘多糖堿提工藝的數(shù)學(xué)模型，確定雞內(nèi)金粘多糖最佳提取工藝為：堿解溫度45℃，堿濃度1.5mol/L，提取時間50min，料液比1：25

3、，粘多糖得率達1.98％。另外由正交實驗顯著性分析結(jié)果可知影響多糖得率因素主次順序為：堿解溫度>堿濃度>時間>液料比。
　　 用堿提取的粘多糖多為蛋白多糖，并非是純多糖，為了將蛋白聚糖中蛋白質(zhì)去除，提高粘多糖多糖得率，本文在堿提的基礎(chǔ)上，研究脫蛋白、脫鹽、乙醇沉淀多糖等純化工藝。先用濃度為10％的三氯乙酸溶液除去游離蛋白質(zhì)，去除率達43.8％，多糖損失率10.3％，再用酶解加三氯乙酸法除結(jié)合蛋白質(zhì)，結(jié)合蛋白去除率達95.5％，多

4、糖增長率為15.33％。用截留分子量為1000的透析袋透析脫鹽，脫鹽率達74.71％。多糖液與無水乙醇比例為1：4即可使粘多糖基本完全沉淀。經(jīng)酶解除雜后提取率可達3.60％。雞內(nèi)金粘多糖的紫外吸收光譜表明不含蛋白質(zhì)、核酸等大分子雜質(zhì)，瓊脂糖凝膠電泳法分析所得的雞內(nèi)金粗粘多糖可能含有兩種組分。
　　 本文建立了兩種方法-乙醇分級沉淀法和Sepharose CL-4B凝膠過濾法來純化、分離雞內(nèi)金粘多糖。經(jīng)乙醇分級沉淀得到單一組分G1

5、，進一步用凝膠過濾法純化得到較純的均一組分G2，占總GAG的67.35％。用瓊脂糖凝膠電泳法鑒定組分G2的純度，其電泳圖譜為一個單一的點。用紅外光譜分析儀分析G2，顯示了其含有-COOH、S=O、C-O、C-O-C、-OH等粘多糖特征基團。
　　 雞內(nèi)金粘多糖理化指標(biāo)的分析。雞內(nèi)金粘多糖G2是一種聚陰離子；用凱氏定氮法測得G2的氮含量為1.87％；用Elson-Morgan改良法測得G2氨基半乳糖含量為31.15％；咔唑地衣酚法